[發明專利]一種泥炭蘚原絲體的獲得及培養方法

有效

• 申請號: 201310573487.8
• 申請日: 2013-11-15
• 公開（公告）號: CN103609443A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 孫越;李澤玲;李小方;朱瑞良
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

技術領域

本發明涉及自然資源的利用及保護領域，具體涉及一種泥炭蘚原絲體的獲得及培養方法。

背景技術

泥炭蘚屬(Sphagnum)屬于苔蘚植物門，蘚綱，泥炭蘚目，該目僅一科一屬。泥炭蘚屬全世界有300多種，我國40余種。泥炭蘚一股生長在沼澤地區，在我國東北和西南林下沼澤地生長茂盛。泥炭蘚是重要的造炭植物之一，它在長期的生長過程中會積累大量泥炭，并最終會成為具有工業利用價值的泥炭礦床，泥炭蘚固碳量占北半球泥炭沼澤固碳總量的一半。另外，泥炭蘚是濕地的主要植物類群之一。由于泥炭蘚泥炭纖維含量豐富，通氣透水性好，結構穩定，是最理想的植物栽培基質，已成為農業、園藝生產中不可缺少的重要原材料。另外，泥炭蘚消毒后可代藥棉使用，植株死層形成之泥炭可作肥料及燃料。近年來，由于需求旺盛，大量出口，導致我國自然泥炭蘚資源被掠奪性開采，許多泥炭蘚濕地資源近乎枯竭，生態系統破壞嚴重。因此發展人工種植泥炭蘚是解決這一問題的必由之路。由于一股泥炭蘚的原絲體只能通過采集孢子萌發獲得。由于泥炭蘚孢子采集困難，而且該原絲體生長周期很短，在幾天內會迅速分化成莖葉體，目前，還沒有穩定大量培養泥炭蘚原絲體的報道。因此，目前泥炭蘚的培養和種植僅僅局限在樣田以及溫室進行，且在國內外均是如此。

發明內容

本發明提出了一種泥炭蘚原絲體的獲得及培養方法，以泥炭蘚的莖葉體為原材料，經多次組織粉碎，在改良的Knop液體培養基中培養，從泥炭蘚組織莖葉體的碎片上長出新的原絲體，將該原絲體進行組織粉碎，再在液體培養基中培養，得到所述泥炭蘚原絲體。利用本發明方法獲得的原絲體可以在短時間內獲得大量生長均一的莖葉體。

其中，所述改良的Knop液體培養基的配方為：磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)250毫克/升，氯化鉀(KCl)250毫克/升，硫酸鎂(MgSO₄.7H₂O)250毫克/升，硝酸鈣(Ca(NO₃)₂.4H₂O)1000毫克/升，硫酸亞鐵(FeSO₄.7H₂O)14毫克/升，pH5.4。

其中，所述組織粉碎是在超凈工作臺上使用組織粉碎儀，用滅菌的組織粉碎刀頭將所述泥炭蘚的莖葉體切成碎片；其中，所述碎片的長度為l-3毫米；優選的碎片長度為2毫米。

其中，所述組織粉碎的初期粉碎時間為10-30秒；后期粉碎時間為30-40秒；優選地，初期粉碎時間較短，為20秒；后期粉碎時間較長，為30秒。

其中，所述培養條件為：18-22℃，搖床轉速120轉/分鐘，24h震蕩，液體培養基pH值為5.4，懸浮培養，光照3500Lux，光照時間16h光照/8h黑暗。

其中，所述粉碎處理為每一次液體培養7-14天之后進行粉碎一次。第一次組織粉碎處理后的間隔期即培養期優選為14天此后組織粉碎的間隔期間優選7天。

其中，所述原絲體培養過程中的組織粉碎是規律連續進行的，若停止粉碎，原絲體將迅速分化為莖葉體。

本發明中多次組織粉碎及培養反復進行至少兩次以上，次數不限，按實際需要調整。

本發明泥炭蘚原絲體的獲得及培養方法的具體步驟，包括：

(1)將泥炭蘚的莖葉體進行脫毒，脫毒方法為70％乙醇30秒，無菌水沖洗3-5次，之后將莖葉體用無菌的濾紙將水分吸干，最后置于改良Knop固體培養基上培養，以獲取無菌的莖葉體材料。

(2)待莖葉體恢復生長后(2-3周后)，取3-5枝健康莖葉體于改良Knop液體培養基中，利用刀頭經過高壓蒸汽滅菌的粉碎機粉碎20s，于搖床上懸浮培養。粉碎時是將粉碎機刀頭插入500ml的大三角燒瓶中，三角燒瓶中所裝培養液的體積一股是200ml。

(3)每隔一周連續粉碎，第一次與第二次粉碎間隔時間可相對增加至10-14天。三次連續粉碎后即可觀察到穩定的泥炭蘚原絲體。

(4)此后，每周粉碎該原絲體一次，每次粉碎30s，當原絲體的量增長過多時，可將原絲體分瓶繼續培養，或按照下面步驟培養成莖葉體。

(5)若需培養成莖葉體，可吸取適量的粉碎后混合泥炭蘚原絲體或碎片的液體培養基于固體培養基上培養，也可直接在液體培養基中培養。液體培養的材料要置于搖床上懸浮培養。培養條件為：光照3500lux，光照時間16h光照/8h黑暗，溫度20-22℃。