[發明專利]全血的標記免疫分析方法和即時檢測系統

有效

• 申請號: 201310573304.2
• 申請日: 2013-11-15
• 公開（公告）號: CN103575882A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 施奇惠;司珂
• 申請（專利權）人: 司珂;施奇惠
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N21/76
• 代理公司: 上海思微知識產權代理事務所(普通合伙) 31237
• 代理人: 鄭瑋

技術領域

本發明屬于快速標記免疫分析技術，具體涉及從全血中通過特異性結合反應快速采集目標物并通過標記技術對目標物進行標記和監測的方法，以及一種即時檢測系統。

背景技術

標記免疫技術具有選擇性高、靈敏度高、普適性好等優點，主要包括放射免疫技術、酶免疫技術、熒光免疫技術、化學發光免疫技術，采用熒光素、同位素或酶等示蹤物質標記抗體（或抗原）進行抗原-抗體反應，通過對免疫復合物中的標記物的測定，達到對免疫反應進行監測的目的。

即時檢測（Point-of-care?testing,POCT）是指在采樣現場即刻進行分析，省去標本在實驗室檢驗時的復雜處理程序，快速得到檢驗結果的一類方法。POCT中免疫分析方法目前已廣泛用于醫療衛生、環境監測、反恐等領域的快速檢測，POCT檢測常用的對象是全血樣本，并且樣品量極少，其較常用的方法是通過毛細管作用驅動血液透過多孔膜實現血細胞與血漿的分離，分離得到的血漿進一步在毛細管作用下進入反應裝置，完成免疫檢測。

按照慣例，血漿可以通過離心法從全血中分離出來，但離心法很耗時，需要特種設備，不適合用于即時測試中。為了避免這個問題，一般采用具有微孔濾質的機械式過濾器分離血漿和紅細胞，文獻CN101918137A中公開了一種類似的采用過濾材料的分離裝置，但由于微孔阻塞的問題，該分離方法會造成檢測樣品的損失，因此對于只有極少量樣品的POCT并不適用。

POCT裝置由于受到小體積、低成本和使用便捷等要求的限制，在極少的樣品量的情況下，無法準確控制檢測過程和剔除背景干擾，檢測的可靠性與精度大大降低。例如，在用吸收膜做為樣品和反應試劑載體的方法中難以準確控制控制反應試劑進入檢測裝置的流速以及在各個特定反應腔中停留的時間，并且常缺乏充分的洗脫以消除非特異性吸附造成的背景干擾。在基于微流控芯片的檢測中，為了充分洗脫、準確控制樣品及反應試劑的流速和反應時間常需要復雜的閥控結構，增加了裝置的體積、成本和復雜度，同時降低了檢測系統的可靠性。

因此只有中心實驗室的大型儀器才具有高靈敏度、高重復性以及準確定量的能力，可以獲得準確的實驗數據，但其與快速檢測方法相比，設備體積大，成本高，檢測時間長。

超順磁性納米微球（superparamagnetics?nano?spheres/particles/beads）簡稱磁珠，是由Senyei?A?E在1978年首先研制出來的一種新型的功能性材料。它的內部是一個磁核，因而在外部磁場的作用下，微球可以定向移動；而微球外部是一層包覆層，表面分布著許多活性基團，可以和細胞、蛋白質、核酸、酶等生化試劑發生偶聯。用于生化分析的磁珠具有以下特點：1)超強的順磁性，就是指在磁場的存在下能迅速聚集，離開磁場能夠均勻分散，不出現聚集顯現現象，文獻CN102333595A中即公開一種使多個順磁顆粒在小體積液體中團聚并隨后均勻分布的方法；2)合適的粒徑且粒徑分布范圍窄，使微球有足夠強的磁響應性，又不會因粒徑太大而發生沉降；3)具有豐富的表面活性基團，以便微球可以和生化物質偶聯，并在外磁場的作用下實現與被待測樣品的分離。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是目前的即時檢索方法靈敏度、穩定性和可重復性低，為了克服以上不足，提供了一種全血的快速免疫分析方法和即時檢測系統。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案是：所述全血的快速標記免疫分析方法，包括以下步驟：

1）磁珠捕獲：抗凝劑處理的全血樣本與負載捕獲抗體的磁珠在第一反應區域混合，所述捕獲抗體與全血樣本中待測抗原結合形成一抗免疫復合物；

2）血液洗脫：施加磁場將一抗免疫復合物聚集、洗脫液替換掉流體；

3）檢測抗體的標記：施加磁場將磁珠轉移至第二反應區域，采用標記免疫技術，檢測抗體與一抗免疫復合物的待測抗原反應形成二抗免疫復合物；

4）檢測抗體的洗脫：施加磁場將二抗免疫復合物聚集，加入洗脫液將未結合的檢測抗體洗脫；和

5）檢測：施加磁場將步驟4）清洗后的二抗免疫復合物移入檢測區并進行檢測。