[發明專利]一種人S100蛋白檢測試劑及制備方法

有效

• 申請號: 201310572894.7
• 申請日: 2013-11-15
• 公開（公告）號: CN103604931A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 陸上蘇
• 申請（專利權）人: 陸上蘇
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/566
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

技術領域

本發明涉及一種人S100蛋白檢測試劑及制備方法，特別是采用乳膠增強免疫比濁法檢測人S100蛋白的試劑及制備方法，可應用在檢驗醫學領域。

背景技術

人中樞神經蛋白（S-100蛋白）主要集中在中樞神經系統的星形膠質細胞及相應的腫瘤細胞內，S-100分子由α和β亞基組成，其分子量為21000，生物半衰期22小時。腦脊液中的S-100蛋白與年齡有關，隨著年齡的增加而增高，但血漿中的S-100蛋白濃度與年齡、性別無確切關系。當中樞神經系統細胞損傷時S100蛋白從胞液中滲出進入腦脊液，再經受損的腦血屏障進入血液。因此腦脊液和血液中S100蛋白增高是中樞神經系統損傷特異和敏感的生化標志。

目前，臨床已經使用S-100蛋白單克隆抗體對臨床標本進行檢測，從檢測角度上來說，目前臨床上用于測定S-100的方法主要有放免法、ELISA法、化學發光法等。

過去以放免為代表的人S100蛋白(S-100)測定試劑受方法學的限制，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市場，目前應用較多的為酶聯免疫檢測技術和化學發光技術。

酶聯免疫法（ELISA）自動化程度不高，且受人為因素影響較大，重復性差，整個反應測定時間也很長（至少需要40分鐘）。

化學發光法(CLIA)是利用化學發光物質經催化劑催化和氧化劑氧化，形成一個激發態的中間體，這種激發態的中間體回到穩定基態時，發出光子，利用發光信號測量儀測量光子數，從而間接測定濃度。該方法又分為兩種，一種是直接標記法，屬于瞬間發光型，很難保證測試結果的穩定性和重復性，而且需要特殊的檢測儀器。不便于常規實驗室開展。第二中生物素-親和素標記電化學發光免疫試劑法，需要配套昂貴的全自動電化學發光檢測儀，常規實驗室無法開展，而且給患者帶來不必要的費用，增加患者負擔。

發明內容

本發明的目的在于克服上述問題，提供一種人S100蛋白檢測試劑；所提供的試劑具有準確度高、測定時間短（最多只需要15分鐘、甚至更短）、重復性好，操作簡單、適用于各種類型的生化分析儀的特點；所提供的試劑制備方法具有制作方便以及成本不高的特點。

人S100蛋白檢測試劑及制備方法，作為兩項發明創造，具有共同的特定技術特征：通過膠乳微粒和抗人S100抗體的偶聯，利用膠乳增強免疫比濁法檢測人血清S100含量，屬于一個相同的發明構思，符合單一性要求。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案為：一種人S100蛋白檢測試劑，包括試劑R1、試劑R2以及校準品，其特征在于：所述試劑R1為PH值為7.0-8.0的改性緩沖液；所述試劑R2為抗人S100蛋白抗體膠乳試劑；所述校準品為含有定量的S100蛋白的重組蛋白或者是從人血清中提取出來的天然S100蛋白。

前述的一種人S100蛋白檢測試劑，所述的試劑用于人外周血血清樣本的測定。

前述的一種人S100蛋白檢測試劑，所述的試劑R1組成如下：

所述緩沖液是磷酸鹽緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、三羥甲基氨基甲烷（Tris）緩沖液、4-(2-羥乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸(HEPES)緩沖液、三羥甲基甲胺基丙磺酸（TAPS）緩沖液、2-嗎啉乙磺酸(MES)、3-嗎啉丙磺酸（MOPS）緩沖液、硼酸緩沖液中的一種或兩種以上任意比例的混合液；緩沖液濃度20-200mmol/L，pH值7.0-8.0；

所述電解質是陰離子電解質或陽離子電解質，優選陽離子中的氯化鈉（NaCl），濃度為50-200mmol/L；

所述促進劑（即反應加速劑）為聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一種或兩種以上任意比例的混合，濃度優選為0.05-30g/L；

所述表面活性劑為吐溫20，濃度為0.2-1.0g/L；

所述防腐劑為疊氮鈉，濃度為2-4mmol/L；

所述穩定劑是乙二胺四乙酸二鈉,濃度為3-5mmol/L。

前述的一種人S100蛋白檢測試劑，試劑R2采用的是抗人的S100蛋白抗體與膠乳顆粒相偶聯。經過離心(過濾)的方法去掉未反應的偶聯劑以及未反應的抗體，在含有穩定劑和防腐劑的緩沖液中分散而成。主要包含抗人單(多)克隆抗體膠乳微球、緩沖液、穩定劑和防腐劑。其中乳膠微球直徑為20-500nm。