[發明專利]基于親和色譜測定超分子相互作用解離速率常數的方法無效
| 申請號： | 201310567416.7 | 申請日： | 2013-11-14 |
| 公開（公告）號： | CN104634909A | 公開（公告）日： | 2015-05-20 |
| 發明（設計）人： | 李海燕;葛靜文;殷憲振;孫立新;張繼穩 | 申請（專利權）人： | 中國科學院上海藥物研究所 |
| 主分類號： | G01N30/88 | 分類號： | G01N30/88 |
| 代理公司： | 北京金信知識產權代理有限公司 11225 | 代理人： | 朱梅;錢程 |
| 地址： | 201203 上海*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 親和 色譜 測定 分子 相互作用 解離 速率 常數 方法 | ||
1.一種基于親和色譜測定超分子相互作用解離速率常數的方法，該方法包括以下步驟：
（1）提供一種鍵合有目標主分子的親和色譜柱；
（2）用流動相制備一定濃度的第一待分析客分子的樣品溶液；
（3）以帶流出方式將所述第一待分析客分子的樣品溶液以一定流速注入色譜系統，采集第一待分析客分子在親和色譜柱上的流出曲線，并通過峰擬合計算第一待分析客分子流出曲線的保留時間、半峰寬及塔板高度（HR）；
（4）用與第一待分析客分子相同的流動相制備第二待分析客分子的樣品溶液；
（5）采用與第一待分析客分子相同的方式獲得第二待分析客分子流出曲線的保留時間、半峰寬及塔板高度（HM,C）；
（6）按照（1）～（5）中所述的方法重復測定其他至少三個不同流速下的HR和HM,C；
（7）比較各個HR與HM,C的大小，若三分之二數目以上的HR>HM,C，則以HM,C作為HM采用公式（3）通過HR-HM對uk/(1+k)2做線性回歸，由斜率計算kd,app：
其中，u為線速度，k為容量因子；
若三分之二數目以上的HR<HM,C，則按照一定的校正方法對HM,C進行校正，得到HM,T，并采用校正后的HM,T作為HM按照公式（3）計算kd,app；
（8）按照（1）～（7）中所述的方法測定第一待分析客分子在空白色譜柱上的容量因子kcontrol和解離速率常數kd,control；
（9）通過第一待分析客分子在親和色譜柱與空白色譜柱上的容量因子比值判斷第一待分析客分子與空白基質相互作用的強弱，并采用公式（4）計算kd。（αcontrol為kcontrol與k的比值，α1=1-αcontrol）
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