[發(fā)明專利]鹽穗木金屬硫蛋白基因及其重組蛋白與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310566742.6
• 申請日: 2013-11-15
• 公開（公告）號: CN103614386A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設計）人: 劉忠淵;哈斯亞提汗·阿布都拉;孟紅恩;張富春
• 申請（專利權）人: 新疆大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/825;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/16;A61P39/02;A61P39/04;A61K8/64;A23L1/29
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1.一種鹽穗木金屬硫蛋白基因，其特征在于，所述的鹽穗木金屬硫蛋白基因具有如序列表SEQ?ID?NO.1所示的堿基序列，其編碼氨基酸序列如表SEQ?IDNO.2所示。

2.一種鹽穗木金屬硫蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如序列表SEQ?I?D?NO.2所示。

3.一種重組表達載體，其特征在于，包含權利要求1所述的鹽穗木金屬硫蛋白基因的核苷酸序列。

4.根據權利要求3所述的重組表達載體，其特征在于，該重組表達載體的載體骨架優(yōu)選pET-32a(+)原核表達載體。

5.一種重組表達轉化體，其特征在于，包含權利要求1所述的核苷酸序列或權利要求3～4任一項所述的重組表達載體。

6.根據權利要求5所述的重組表達轉化體，其特征在于，其為大腸桿菌E.coliBL21(DE3)。

7.一種重組鹽穗木金屬硫蛋白的制備方法，培養(yǎng)誘導權利要求5所述的重組表達轉化體，獲得重組的鹽穗木金屬硫蛋白，其特征在于，具體通過將提取的質粒pET32a-HcMT5μL轉化感受態(tài)細胞E.coli?BL21，氨芐青霉素篩選獲得陽性克隆；將含重組質粒的陽性克隆在37℃培養(yǎng)過夜，再以1％比例接種，37℃培養(yǎng)2～3h，當菌液的吸光度值A₆₀₀達到0.6時，加入IPTG至終濃度0.5M，于37℃誘導6h；取培養(yǎng)液1.5mL，12000rpm離心3min，收集沉淀，沉淀用pH7.4的50μL?PBS重懸，然后加入等體積的SDS緩沖液振蕩后，置沸水浴中5min，12000rpm離心10min，采用SDS-PAGE電泳檢測結果，證實獲得純化的重組鹽穗木金屬硫蛋白。

8.一種如權利要求1-3任一項所述的重組鹽穗木金屬硫蛋白在制備重金屬螯合解毒劑中的應用。

9.一種如權利要求1-3任一項所述的重組鹽穗木金屬硫蛋白在制備食品保健營養(yǎng)素中的應用。

10.一種權利要求1-3任一項所述的重組鹽穗木金屬硫蛋白在制備化妝品添加劑中的應用。