[發明專利]一種用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術有效
| 申請號： | 201310563819.4 | 申請日： | 2013-11-14 |
| 公開（公告）號： | CN103740808A | 公開（公告）日： | 2014-04-23 |
| 發明（設計）人： | 周東蕊;張紅琳;白志茂;嚴勇;陸祖宏;肖鵬峰;李清寧 | 申請（專利權）人： | 東南大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙) 11341 | 代理人： | 李濤 |
| 地址： | 215123 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 食品 病原微生物 鑒定 單個 核酸 分子 檢測 技術 | ||
1.一種用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，檢測步驟如下：
（1）分離待檢測食品中的微生物，并提取基因組DNA；采用超聲波或DNA破碎酶將上述基因組DNA隨機打斷成200～1000bp的片段；
（2）用DNA合成儀合成一條探針，并用丙烯酰胺對探針進行標記；
（3）將步驟（2）中標記后的探針與步驟（1）中打斷的基因組DNA片段雜交；
（4）將步驟（3）中雜交后的溶液與丙烯酰胺貯存液混合，將均勻混合液平鋪于基片上進行凝固形成膠，然后用非變性電泳液電泳去除未雜交上去的片段和未膠連上去的分子；
（5）向步驟（4）中電泳后的膠上滴加核酸分子擴增反應液、核酸熒光染料混合液，將混合液與膠一起密封在基片上并置于控溫裝置中，進行核酸分子原位擴增；
（6）用分辨率高于2048×2048的熒光顯微鏡或掃描儀進行熒光信號采集，根據陽性點的數量判斷待檢測樣本的病原菌是否存在。
2.根據權利要求1所述的用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，所述病原微生物為細菌、古細菌、真菌、病毒、支原體和藻類，來自于食品、水、空氣和患者排瀉物。
3.根據權利要求2所述的用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，所述病原微生物是含有特征核酸分子的病原體。
4.根據權利要求3所述的用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，所述特征核酸分子為單鏈或雙鏈RNA，DNA，cDNA直鏈核酸分子或環形核酸分子。
5.根據權利要求1所述的用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，所述步驟（3）中的基片為載玻片、硅片或芯片。
6.根據權利要求1所述的用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，所述步驟（5）中的核酸分子原位擴增技術為PCR原位擴增或恒溫原位擴增。
7.根據權利要求6所述的用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，所述原位擴增采用原位單分子在三維膠內進行。
8.根據權利要求1所述的用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，所述步驟（5）中的核酸熒光染料為SYBR?Green?Ⅰ、Genefinder和Geneview中的至少一種。
9.根據權利要求8所述的用于食品病原微生物鑒定的單個核酸分子檢測技術，其特征在于，所述核酸分子熒光染料與核酸分子擴增反應混合物一起添加或在擴增反應后添加。
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