[發明專利]帶Flag標簽的LAMP1真核表達載體及其在溶酶體分離中的應用

在審

• 申請號: 201310560532.6
• 申請日: 2013-11-12
• 公開（公告）號: CN104630264A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 張磊;李紅昌;楊詩涵
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C12N5/07
• 代理公司: 深圳市科進知識產權代理事務所(普通合伙) 44316
• 代理人: 沈祖鋒;郝明琴

1.一種帶Flag標簽的LAMP1真核表達載體，其特征在于其中所含的帶Flag標簽的LAMP1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的帶Flag標簽的LAMP1真核表達載體，其特征在于：所述帶Flag標簽的LAMP1真核表達載體所用真核表達載體為pcDNA3.1（+）載體。

3.權利要求1或2所述的帶Flag標簽的LAMP1真核表達載體的構建方法，其特征在于包括如下步驟：

以Hela細胞的cDNA為模板，用SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3序列所示的特異性引物擴增得到含BamH?I酶切位點及Xho?I酶切位點的LAMP1-Flag片段；分別對PCR擴增的LAMP1-Flag基因與pcDNA3.1（+）載體使用限制性內切酶BamH?I和限制性內切酶Xho?I進行雙酶切，純化酶切產物；將載體和LAMP1-Flag基因片段按照質量比為2.5:1-5:1的比例在DNA連接酶的作用下進行連接并轉化，挑取單克隆擴大培養并提取重組質粒，通過檢測，獲得重組表達載體pcDNA3.1（+）-LAMP1-Flag。

4.權利要求1或2所述的帶Flag標簽的LAMP1真核表達載體應用于研究溶酶體代謝機制的分子細胞生物學技術領域。

5.權利要求1或2所述的帶Flag標簽的LAMP1真核表達載體在溶酶體分離中的應用。