[發明專利]檢測人老齡化的多肽標志物

有效

• 申請號: 201310560354.7
• 申請日: 2013-11-12
• 公開（公告）號: CN103694342A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 鄧玉林;張玫
• 申請（專利權）人: 北京理工大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 北京永瑞專利代理事務所(普通合伙) 11450
• 代理人: 張慶敏

技術領域

本發明涉及蛋白質組學技術的應用，具體地說，涉及一種應用蛋白質組學技術研究檢測人老齡化的多肽標志物。

背景技術

衰老(Aging)通常是指在正常狀況下生物發育成熟后，隨年齡增加自身機能減退，內環境穩定能力與應激能力下降，結構、組分逐步退行性變，趨向死亡，不可逆轉的現象。

衰老機制的研究，現代已經從整體水平、器官水平發展到細胞水平、分子水平。總的說來，整體水平的衰老變化是機體全身性變化的反映，也就是通常所講的老征(Senile?Symptoms)現象，以及機體的形態結構與生理功能方面的退行性變化。近年來衰老在細胞水平、分子水平變化的研究也取得了很快的進展,總的看法是細胞及其細胞膜、細胞器、細胞核都在衰老過程中表現出明顯的增齡變化,同時細胞間質也隨增齡而逐步老化。目前國內外對衰老機制開展的多方面研究都有很大的進展,已有多個解釋衰老過程的理論被提出，但還尚未有某個單一理論被廣泛的接受。例如，老齡化的過程被歸因于分子的交聯、免疫功能的改變、自由基引起的損傷、與衰老有關的基因以及最近提出的端粒學說。衰老作為一個顯著的生理過程，仍然是個人類認知中的未解之謎，也許該過程本就難以用單一的理論加以解釋，目前人們更傾向于認為老齡化的過程是由多個因素共同影響的結果。我國的老年病研究起步較晚，但卻面臨著人口基數大，人口增長速度快等嚴峻的形式。1994年我國老年人人口比例占人口總數的8.8%，到了1999年10月這個比例已增長至10%，全國進入老齡化社會。目前，我國老年人絕對數已達到1億以上，預計到2030年將達到3.75億，占人口總數的24.75%。面對我國快速進入老年型國家的局面，我國老年性癡呆及相關疾病的患病率已經超過10%，即已經超過千萬的患者，占世界首位，其中老年性癡呆患者已經超過600萬。由于這類疾病的發病機制尚不清楚、早期診斷困難且病因復雜。隨著人口老齡化的進一步加劇，老年性疾病在50年內將可能增加一倍，因此研究老年性癡呆及相關疾病的生物標志物就成為了刻不容緩的迫切任務。

已經有研究的衰老生物標志物，例如腫瘤抑制因子P16(INK4a)、Prelamin?A、端區，端粒、晚期糖基化終產物(AGEs)等，還有一些其它生物標志物，如視網膜上皮細胞色素retinal?pigment?epithelium(RPE)、TNF-alpha的合成量、長醇等。

在交聯學說中，比較關鍵的一個反應是美拉德反應。該反應是還原糖與蛋白氨基酸側鏈的氨基之間進行的反應，該反應會通過一系列復雜的過程最終引發蛋白的交聯。在美拉德反應的早期階段，首先會通過形成希夫堿進而經過重排形成Amadori產物（早期糖基化產物），在這一過程中，美拉德反應是可逆的。接下來經過縮合、二聚、交聯等一系列復雜的反應過程，最終形成了晚期糖基化終產物(AGEs)，且反應發展到這個階段不再是不可逆的。有研究表明AGEs在體內的積累與老齡化疾病相關。而美拉德反應也可以發生在醛類物質與蛋白氨基酸側鏈的氨基之間，因為醛類物質與還原糖類似，都具有作為親電試劑的甲酰基，從而被氨基的孤對電子進攻發生修飾，而最終導致蛋白功能的喪失，宏觀上即表現為“衰老”。

在生理條件下，各種內源或外源性的醛類物質可以通過氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)催化伯胺產生。SSAO酶廣泛分布在不同的組織中，特別是在血管平滑肌細胞和脂肪組織中有更多的分布。該酶能催化各種胺形成的醛(包括甲醛、丙酮醛等)和過氧化氫。且有文獻報道在老齡化相關疾病中，SSAO酶在老齡化疾病中活性顯著上調，從而可更有效率地去催化產生甲醛，因此推測催化生理底物甲胺和氨基丙酮所產生的甲醛及丙酮醛也會相應上調，這也就是為什么會有不合符年齡趨勢的“早衰”現象的產生。而接下來，產生的甲醛和丙酮醛等醛類物質就可以通過美拉德反應對蛋白進行修飾，使蛋白最終因為交聯而喪失功能。因此，在本發明中發明人借助人血清白蛋白(HSA)建立了一個體外蛋白被交聯的模型，用以尋找人老齡化生物標志物。

發明內容

本發明的技術目的是提供一種新篩選出的用于檢測人老齡化的多肽標志物。

本發明的另一個目的是提供一種基于質譜的不依賴常規標品非標記的蛋白質組學方法，用以篩選人類老齡化程度的生物標志物。

本發明的技術方案是：

檢測人老齡化的多肽標志物，肽段序列為LDELRDEGK（如SEQ?ID?NO.1所示）和/或VFDEFKPLVEEPQNLIK（如SEQ?ID?NO.2所示）。