[發明專利]植物中轉基因蛋白CP4-EPSPS的定量檢測方法有效
| 申請號： | 201310560297.2 | 申請日： | 2013-11-12 |
| 公開（公告）號： | CN103698418A | 公開（公告）日： | 2014-04-02 |
| 發明（設計）人： | 鄧玉林;張玫 | 申請（專利權）人： | 北京理工大學 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 北京永瑞專利代理事務所(普通合伙) 11450 | 代理人： | 張慶敏 |
| 地址： | 100081 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 植物 中轉 基因 蛋白 cp4 epsps 定量 檢測 方法 | ||
【權利要求書】：
1.植物中轉基因蛋白CP4-EPSPS的定量檢測方法，其特征在于：從植物中提取蛋白，得到蛋白粗提液；將蛋白粗提液進行酶切，采用18O標記的3個CP4-EPSPS的特異性肽段作為內標，用UPLC/ESI-QQQ?MS檢測，在肽段水平上定量CP4-EPSPS；其中所述3個特異性肽段序列為ITGLLEGEDVINTGK、SFMFGGLASGETR和LAGGEDVADLR。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述提取蛋白時采用pH7.6的Tris-HCl作為提取溶劑。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶切時采用胰蛋白酶酶切，酶切反應時間為24h，其中蛋白:胰蛋白酶=50:1(w/w)。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：18O標記的過程為：將特異性肽段樣品溶于用H218O配制的50mM?KH2PO4緩沖液中，隨后加入分別用H218O溶解的胰蛋白酶，其中蛋白:胰蛋白酶=50:1(w/w)，在37℃水浴中標記20h。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述植物是經濟作物。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述作物是煙葉。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法是絕對定量方法。
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