[發明專利]一種利用絮凝作用延長細菌發酵生產丁二酸周期的方法

在審

• 申請號: 201310559935.9
• 申請日: 2013-11-12
• 公開（公告）號: CN104630290A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 馬江鋒;方曉江;劉經偉;李澤壯;劉麗娟;王英武;陳韶輝;楊愛武
• 申請（專利權）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石化揚子石油化工有限公司
• 主分類號: C12P7/46
• 分類號: C12P7/46;C12R1/19
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 黃嘉棟

1.一種利用絮凝作用延長細菌發酵生產丁二酸周期的方法，其特征是包括下列步驟：（1）菌種活化：從甘油凍存管中取少量菌液，在LB平板上劃線后放置于37℃下培養12h；

（2）種子液制備：從LB平板上取單菌落，接種于LB液體培養基，在37℃，200r/min條件下搖瓶培養6～8h，至菌體密度（OD₆₀₀）值在0.6～0.8之間；

（3）發酵產丁二酸過程：按3～10%的接種量接種發酵培養基，先同空氣有氧培養至菌體密度（OD₆₀₀）值在30～40之間，再以0.1～0.2vvm的通氣流量連續通二氧化碳氣體維持發酵罐中厭氧環境，并以碳酸鈉作為酸中和劑控制pH值在6.4～7.2，控制溫度在35～40℃；

（4）在一次厭氧發酵結束時，培養基中一次性添加絮凝劑，其使用總量在0.25～0.75g/L之間，然后停止發酵罐的攪拌，使發酵液靜置5～10分鐘后，用泵從預先插入發酵罐四分之三液位處的管子將發酵液抽出四分之三發酵液，發酵液中的細胞此時絕大多數沉在發酵罐的底部，隨后補入相同體積的新鮮培養基，開啟攪拌繼續發酵。

2.根據權利要求1所述的延長細菌發酵生產丁二酸周期的方法，其特征是：步驟（1）所述的菌種是產丁二酸重組大腸桿菌。

3.根據權利要求2所述的延長細菌發酵生產丁二酸周期的方法，其特征是：產丁二酸重組大腸桿菌是大腸埃希氏菌BA308。

4.根據權利要求1所述的延長細菌發酵生產丁二酸周期的方法，其特征是：步驟（4）所述的絮凝劑是海藻酸鈉、殼聚糖或聚乙烯亞胺中的一種或者多種混合物。

5.根據權利要求1所述的延長細菌發酵生產丁二酸周期的方法，其特征是：所述的絮凝的細胞能重復循環發酵3～5次。