[發明專利]一種寡核苷酸文庫修飾的顆粒及其制備和應用

有效

• 申請號: 201310557895.4
• 申請日: 2013-11-08
• 公開（公告）號: CN104634915A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 張麗華;鄧楠;梁振;朱貴杰;楊開廣;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.寡核苷酸文庫修飾的基質材料，其特征在于：基質材料為磁性顆粒、聚丙烯酸酯類聚合物基質顆粒或金顆粒，寡核苷酸文庫是人工合成的隨機寡核苷酸文庫，寡核苷酸鏈的序列具有隨機性；寡核苷酸鏈鍵合于基質材料表面。?

2.按照權利要求1所述的材料，其特征在于：基質材料粒徑為1.0nm-50mm，寡核苷酸文庫中寡核苷酸鏈的堿基數目在20-100之間。?

3.按照權利要求1所述的寡核苷酸文庫修飾的材料，其特征在于：寡核苷酸文庫與基質材料的鍵合方式為：生物素-親和素相互作用，羧酸根與氨基反應鍵合，金與巰基鍵合，雙鍵與雙鍵反應中的一種或二種以上。?

4.按照權利要求1所述的材料，其特征在于：?

所述磁性顆粒為四氧化三鐵磁性顆粒，聚丙烯酸酯類聚合物為聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸乙酯、聚丙烯酸丁酯等以丙烯酸酯為單體的聚合物。?

5.一種權利要求1或2所述的寡核苷酸文庫修飾的基質材料的制備方法，其制備過程包括以下具體步驟：?

（1）磁性基質顆粒：將寡核苷酸文庫溶液與磁性顆粒以0.2-10nmol/mg比例在三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液（Tris-HCl）中室溫條件下反應0.5-12h，得寡核苷酸文庫修飾的磁性顆粒材料；?

或（2）聚丙烯酸酯基質材料：將寡核苷酸文庫溶液與功能化的聚丙烯酸酯基質材料以0.5-250nmol/mg的比例在磷酸緩沖溶液中室溫條件下反應3-24h，得寡核苷酸文庫修飾的聚丙烯酸酯基質材料；?

或（3）金顆粒：將寡核苷酸文庫溶液與金顆粒以摩爾數為50:1的比例在水溶液中室溫條件下反應1-6h，得寡核苷酸文庫修飾的金顆粒材料。?

6.一種權利要求1-4任一所述的寡核苷酸文庫修飾的基質材料的應用，其用于蛋白質樣品預處理的過程：修飾寡核苷酸文庫的材料采用10-100mM?Tris-HCl緩沖液洗滌2-5次后，與蛋白質樣品在1-25℃條件下孵育0.5-10h；去除上清；采用20-150mM?Tris-HCl緩沖液洗滌材料4-6次，去除上清后，依次采用氯化鈉溶液洗滌3-6次、甘氨酸溶液洗滌3-6次、尿素溶液洗滌3-6次和十二烷基磺酸鈉溶液洗滌3-6次，并分別收集不同洗脫液洗滌后的溶液，即獲得蛋白質樣品預處理后的4個組份。?

7.按照權利要求5所述的制備的材料的應用，蛋白質樣品包括體液或組織樣品中的一種或二種以上。?