[發明專利]一種快速檢測五種β-地中海貧血突變的試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 201310556987.0
• 申請日: 2013-11-11
• 公開（公告）號: CN103602736A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 尹愛華;張彥;何天文;陳漢彪;杜麗
• 申請（專利權）人: 廣東省婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞;裘暉

技術領域

本發明屬于疾病檢測產品領域，特別涉及一種快速檢測五種β-地中海貧血突變的試劑盒及其應用。

背景技術

β-地中海貧血是由于β-珠蛋白基因突變導致β-珠蛋白肽鏈合成障礙為特征的遺傳性溶血性貧血，為我國南方各省發病率最高、影響最大的遺傳病之一。迄今為止，全世界已報道200多種β-珠蛋白基因突變，而我國也發現了30多種，其中-28、CD17、CDs41/42、CDs71/72、IVS-Ⅱ-654這五種突變占了我國β-珠蛋白基因突變的90%以上。β-地中海貧血患者根據β-珠蛋白鏈合成程度不同其臨床輕重不一：輕型患者無癥狀或僅有輕度貧血，臨床容易漏診；中間型可有中度貧血，脾臟輕或中度大；重型患者表現為嚴重的慢性進行性貧血，需依靠輸血和去鐵治療維持生命，致死性極高，預防還是最佳的應對措施，臨床上主要通過對可疑β-地中海貧血患者進行基因診斷（包括產前診斷）來達到控制重型β-地中海貧血患兒出生的目的。

目前最常用的基因診斷方法是反向斑點雜交技術和DNA直接測序法。反向斑點雜交技術能夠一次性檢測β-珠蛋白基因的17個常見突變位點，但是該法耗時長，操作繁瑣，檢測結果受PCR反應體系、緩沖液、DNA純度等因素影響，容易造成誤診甚至漏診，而DNA直接測序法儀器試劑成本較高、檢測周期長，對雜合突變、富集GC的樣本很難一次檢測獲得準確數據，也有報道將TaqMan探針法、基因芯片技術應用于β-地中海貧血基因突變的檢測，然而，這些技術操作復雜、實驗需要精密儀器和特殊的標記引物、試劑耗材成本昂貴，在臨床上無法普遍推廣應用。

高分辨率熔解曲線(high?resolution?melting，HRM)是最近興起的用于突變掃描和基因分型的技術，其基本原理為利用雙鏈DNA受熱解離成為單鏈的核酸物理特性，采集解鏈時釋放的熒光信號繪制熔解曲線，再通過熔解曲線的變化來反映核酸性質的差異。HRM具有高靈敏度、特異性好、操作簡單、完全閉管操作等優點，其檢測不受突變堿基位點和種類的限制。

申請號為201210382305.4的中國專利公開了“HRM法檢測突變型a-地中海貧血基因的試劑盒和方法”，該試劑盒可同時檢測6種突變型a-地中海貧血，目前國內尚未有關于應用高分辨率熔解曲線（HRM）檢測β-地中海貧血基因突變方面的專利報道。

發明內容

為克服現有技術的缺點與不足，本發明的首要目的在于提供一種快速檢測五種β-地中海貧血突變的試劑盒。所述五種β-地中海貧血突變指的是-28（c.-78A>G）、CD17（c.52A>T）、CDs41/42（c.126_129delCTTT）、CDs71/72（c.216_217insA）、IVS-Ⅱ-654（c.316_197C>T）。

本發明的另一目的在于提供應用上述試劑盒進行快速檢測五種β-地中海貧血突變的方法。

本發明的再一目的在于提供所述試劑盒的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種快速檢測五種β-地中海貧血突變的試劑盒，包括-28位點引物對、CDs41/42和CDs71/72位點引物對、CD17位點引物對和IVS-Ⅱ-654位點引物對：

-28位點引物對：

上游引物為：5’-CCAATCTACTCCCAGGAGCA-3’；

下游引物為：5’-ACTTCTCCTCAGGAGTCAGGT-3’；

CDs41/42和CDs71/72位點引物對：

上游引物為：5’-GAAGACTCTTGGGTTTCTGA-3’；

下游引物為：5’-AGAAAACATCAAGGGTCCCA-3’；

CD17位點引物對：

上游引物為：5’-AGACACCATGGTGCACCTGAC-3’；

下游引物為：5’-GGCAGAGAGAGTCAGTGCCTA-3’；

IVS-Ⅱ-654位點引物對：

上游引物為：5’-GTGTACACATATTGACCAAATCAGGGTA-3’；

下游引物為：5’-GGTAGCTGGATTGTAGCTGC-3’。