[發明專利]一種禽流感H9亞型滅活疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310553960.6
• 申請日: 2013-11-08
• 公開（公告）號: CN103736088A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 陳瑞愛;林綺萍;陳春麗;黃文科;徐家華;嚴潔珍
• 申請（專利權）人: 廣東大華農動物保健品股份有限公司;肇慶大華農生物藥品有限公司
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

技術領域

本發明屬于動物用生物制品技術領域，具體涉及一種禽流感H9亞型滅活疫苗及其制備方法和應用。?

背景技術

禽流感（Avian?Influenza，AI），是由流感病毒屬的A型流感病毒引起的禽類感染和疾病的總稱。雞、火雞、鴨和鵪鶉等家禽及野鳥、水禽、海鳥等均可感染，而對家養的雞和火雞引起的危害最為嚴重，候鳥、觀賞鳥、散禽攜帶病毒遷徙可能是禽流感世界性流行的主要原因，豬等也可作為“混合器”傳播本病。?

根據禽流感病毒AIV對禽類致病性的差異，可將AIV分為高致病性禽流感病毒（HPAIV）和低致病性禽流感病毒（LPAIV）。H9亞型禽流感屬于低致病性流感病毒，是目前我國雞群中存在的AIV主要亞型，該病毒發病后雖然致死率不高（一般不超過30%），但常導致呼吸道癥狀，蛋雞的產蛋下降，并使雞群易繼發嚴重的呼吸道疾病，影響家禽生產性能。目前其流行特點是：H9亞型仍是當前流行的主要亞型；H9亞型已發生變異；H9亞型成散發或地方性流行；H9亞型呈現出條件性致病的特性；H9亞型對肉仔雞危害日益嚴重。?

AIV遺傳變異極為頻繁，血清亞型眾多。研究發現，AIV可通過基于的點突變、基因重組和節段重排而發生不同程度的變異，從而使流感病毒的抗原性和致病性發生改變。AIV的變異主要發生在HA和NA基因上，尤其是HA基因，其分子機理主要有：抗原漂移、抗原轉變、RNA重組和缺損性病毒顆粒的產生等。近些年，隨著反向遺傳學的發展，禽流感遺傳變異和其機制逐步得到證實。?就H5亞型而言，根據當前H5亞型的變異情況，采用反向遺傳技術獲得了Rec-1、Rec-4、Rec-5和Rec-6疫苗株，在高致病性禽流感的防控方面取得了一定的成績。關于H9亞型的變異研究也一直在進行中。劉巖對1998-2002年間分離的H9亞型禽流感病毒的抗原性變異進行了研究，經交叉HI試驗、雞胚中和試驗、細胞中和試驗、交叉攻毒保護試驗及HA基因分析，證明了H9亞型禽流感病毒已經發生了抗原性漂移。而姜北宇等人的研究則表明，1998-2008年在北京及河北省分離的4株H9亞型禽流感流行毒株間大多產生了較好的交叉保護力，用1998-2006年分離的流行毒株制備的滅活疫苗能夠保護2008年流行毒株的攻擊。可見，對于H9亞型禽流感病毒流行毒株抗原性是否發生變異的問題，不同報道得出的試驗結論存在較大的差異。?

疫苗免疫仍是目前防控H9亞型禽流感有效辦法之一。隨著H9亞型禽流感滅活疫苗單苗或者聯苗的廣泛應用，近些年來，在免疫壓力的作用下，開始出現以前使用的疫苗毒株對現地分離毒株的免疫保護力下降，許多養殖單位根據自身免疫需要紛紛采用現地流行毒株制成滅活疫苗來防控H9亞型禽流感的發生，但這些疫苗不能正規生產、銷售和大面積推廣，并且不能保證其安全性。因此，針對疫病現在的流行特點，重新篩選安全、有效、穩定的禽流感H9亞型病毒株制備H9亞型滅活疫苗顯得非常必要。?

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種利用2株不同地方分離的H9亞型禽流感毒株制備成一種免疫原性強、交叉保護性好的滅活疫苗，用于預防雞H9亞型禽流感。?

為解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：?

一種禽流感H9亞型滅活疫苗，由2株H9亞型禽流感病毒經滅活后和油佐劑混合?組成，2株H9亞型禽流感病毒分別為HZ株和FJ株，其保藏登記號分別為CGMCC?NO.8355和CGMCC?NO.8354；HZ株的HA基因序列如SEQ?ID?NO:1所示，FJ株的HA基因序列如SEQ?ID?NO:2所示。HZ株和FJ株于2013年10月15日提交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，該中心于2013年10月18日收到上述保藏菌株，保藏日期為2013年10月18日，該中心地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，郵編100101。?

一種禽流感H9亞型滅活疫苗的制備方法，其特征在于包括如下步驟：?

1）制備H9亞型禽流感病毒HZ株毒液：將H9亞型禽流感病毒HZ株用生理鹽水作10^-4稀釋，接種9～11日齡SPF雞胚，無菌收獲24～96小時內死亡及96小時后仍存活的HA≥8log2的雞胚尿囊液作為H9亞型禽流感病毒HZ株毒液；?