[發明專利]一種雙鏈聚肌胞干粉的制備方法

有效

• 申請號: 201310552020.5
• 申請日: 2013-11-08
• 公開（公告）號: CN103599071A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 傅得響;盧凰姍;王宏;費麗燕;郭蘇
• 申請（專利權）人: 杭州美亞藥業有限公司
• 主分類號: A61K9/14
• 分類號: A61K9/14;A61K31/80;A61K39/39;A61K8/84;A61K47/36;A61K47/34;A61K47/26;A61K47/12;A61K47/04;A61P1/16;A61P35/00;A61P31/12;A61P37/02
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 趙芳;徐關壽

技術領域

本發明涉及一種雙鏈聚肌胞干粉的制備方法。

背景技術

雙鏈聚肌胞是一種人工合成的雙鏈核糖核酸，可誘導產生干擾素，具有廣譜抗病毒作用；此外還有調節機體免疫功能，增強人體非特異性免疫功能和某些特異性免疫功能，達到抗肝細胞壞死和抗腫瘤作用等。

雙鏈聚肌胞在化妝品中應用可以消除痘痘、扁平疣等皮膚贅生物。

雙鏈聚肌胞在獸藥方面主要應用于預防和治療家禽、家畜病毒性疾病，使用方便、廣泛，可以與許多藥物同時使用,?具有協同或相加作用。本品無種屬特異性，可廣泛在家禽、豬、牛等動物上使用，同時它還具有抗病毒譜廣，毒性小、安全范圍大的優點。

雙鏈聚肌胞是一種動物免疫增強劑，可作為疾病治療輔助用藥，增強動物肌體免疫力、提高藥物的療效。同時，雙鏈聚肌胞也是一種免疫佐劑，在用疫苗免疫的同時使用，可明顯提高免疫效果，并且有預防免疫應激及其它病毒性疾病的發生。

一方面，目前粉末狀聚肌胞是制劑形式（是預混劑，不是原料形式），一般多采用聚肌苷酸溶液和聚胞苷酸溶液經聚合后，直接添加輔料制得，該干粉中聚肌胞的含量偏低。?

另一方面，現已報道的文獻中，聚肌胞制劑的制備一般是以聚肌苷酸、聚胞苷酸為原料經過一步反應后得到中間體聚肌胞溶液，再進行制劑工序的操作。其不足之處在于，首先制劑生產線中增加聚合反應步驟，不僅增加操作的復雜性，還增加了監控的難度。其次，聚肌胞中間體是以溶液形式存在，貯藏條件及期限更加嚴格。

因此，本領域迫切需要提供一種含量高、穩定性高且制備簡單的雙鏈聚肌胞干粉的制備方法。

發明內容

本發明目的是提供一種含量高、穩定性高且制備簡單的雙鏈聚肌胞干粉的制備方法。

????本發明采用的技術方案是：

一種雙鏈聚肌胞干粉的制備方法，所述方法包括：

（1）????將聚肌苷酸和聚胞苷酸各自用適量pH?6.0~8.0的磷酸鹽緩沖液溶解，混合后加入穩定劑，混合均勻，在40~100℃下保溫0.5~5小時；所述穩定劑為下列之一或其中兩種以上的混合物：卡那霉素、殼寡糖、氯化鈣、多聚賴氨酸（包括各種規格的ε-多聚賴氨酸、L-多聚賴氨酸等）、葡萄糖酸鈣；所述聚肌苷酸、聚胞苷酸質量用量之比為1∶0.5～1.5，穩定劑質量為聚肌苷酸和聚胞苷酸質量之和的0.2~2.0倍；所述磷酸鹽緩沖液用量以將聚肌苷酸和聚胞苷酸充分溶解為宜，推薦用量為將聚肌苷酸和聚胞苷酸配制成10~100?g/L的溶液；

（2）步驟（1）反應液自然冷卻后與0.5~20倍體積的有機溶劑混合，靜置沉淀0.5~72小時，取沉淀物20~60℃低溫干燥，即得所述雙鏈聚肌胞干粉；所述有機溶劑為下列之一或其中兩種以上的混合物：乙醇、甲醇、丙酮、乙醚、異丙醇、正丙醇。

本發明中的雙鏈聚肌胞干粉為原料形式，采用堿基互補配對原則將多聚肌苷酸、多聚胞苷酸，并加入穩定劑聚合后，再用有機溶劑沉淀得到高質量的雙鏈聚肌胞干粉。該干粉中雙鏈聚肌胞含量高，可直接用于各種劑型制劑的制備，可以使制劑的制備過程更加簡單，易于操作，目前市場需求量很大。另外，加入穩定劑不僅可以增大分子量，還可以使雙鏈聚肌胞的穩定性（由于PIC為大分子聚陰離子，加入穩定劑后可以使PIC雙鏈結構的穩定性增加）增強，優于溶液形式，易于保存。另外經過有機溶劑沉淀處理后樣品的增色效應（通過堿處理使雙鏈聚肌胞的雙螺旋結構破壞,堿基充分外露,?導致紫外吸收增加的現象稱為增色效應，該指標直接影響產品的功效）指標更優。

優選的，步驟（1）所述穩定劑為殼聚糖，多聚賴氨酸（包括各種規格的ε-多聚賴氨酸、L-多聚賴氨酸等）或卡那霉素。

優選的，步驟（2）所述有機溶劑為乙醇或甲醇。

優選的，步驟（1）中，所述聚肌苷酸、聚胞苷酸質量用量之比為1∶0.8～1.2，穩定劑質量為聚肌苷酸和聚胞苷酸質量之和的0.2~1.5倍。?

所述雙鏈聚肌胞干粉可進一步制成雙鏈聚肌胞水溶液，因此所述方法在步驟（2）之后還可包括步驟（A）：配制pH6.0~8.0的磷酸鹽緩沖液，加入適量的雙鏈聚肌胞干粉和NaCl，定容至雙鏈聚肌胞干粉終濃度為0.01~1.0?g/L，NaCl終濃度為4.5g~9.0g/L，即得所述雙鏈聚肌胞水溶液。按此方法制得的雙鏈聚肌胞水溶液，療效高，安全可靠，無毒、無害、無殘留，工藝簡單，實用性強，可用于預防和治療人和動物病毒性疾病，也可用作免疫佐劑。