[發明專利]一種修飾樹突細胞以增強對抗原應答反應的方法

在審

• 申請號: 201310548791.7
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN104630274A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 陶英亮
• 申請（專利權）人: 陶英亮
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87;C12N5/10
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及一種通過抑制樹突細胞(DC)中恒定鏈蛋白(li)的表達來增強其對抗原細胞應答的方法。

背景技術

樹突細胞(DC)是一種專門將抗原呈遞給未成熟或者休眠T細胞的細胞，因此在T細胞、B細胞免疫中都起到重要作用。由腫瘤抗原引起的DC免疫是一種有效的誘導抗腫瘤免疫的方法。一種將DC與腫瘤抗原裝載在一起的有效方法是將DC與重組病毒載體一起轉導或將其轉染編碼腫瘤抗原的mRNA。已有研究證明，小鼠和人類的DC與mRNA轉染在體內外都能夠刺激細胞毒T淋巴細胞(CTL)反應。用腫瘤RNA轉染的DC治療荷瘤小鼠后，腫瘤轉移降低，存活率提高。I期臨床試驗中，通過利用前列腺特異性抗原(PSA)mRNA轉染DC治療前列腺癌癥患者，患者體內的PSA特異性T細胞應答被激活。在小鼠和人體內用mRMA轉染DC來刺激免疫并產生保護性免疫的效果已經得到證實。將mRNA轉染DC技術的關鍵優勢在于，mRNA可以從幾個細胞中放大并由此有足夠的，可能是無限的抗原從少量的腫瘤組織產生。因此，用腫瘤衍生的mRNA轉染的DC接種提供了一種有效且可以廣泛應用的治療轉移癌方式，該方法不需要每個病人的相關抗原特征，也不會受到抗原制備所需的腫瘤組織的限制。

在抗腫瘤免疫反應中，CD8+細胞毒T細胞是一個重要的效應器，誘導強有力的CTL反應已經發展為癌癥免疫治療的一個主要目標。然而，越來越多的證據有力地表明，在腫瘤免疫中CD4+T細胞的反應也起到了關鍵作用，CD4+T細胞為CD8+T細胞CTL的誘導，持久性和擴展提供了重要作用。此外，CD4+T細胞通過分泌效應細胞因子，如IFN-γ，使腫瘤細胞對CTL敏感而胞溶。CD4+T細胞在腫瘤部位刺激免疫系統并抑制局部血管生成。CD4+T細胞反應在腫瘤免疫中的重要性已在小鼠研究中得到證明：CD4+T細胞在缺少CD8+T細胞的情況下可以消除腫瘤。在抗腫瘤反應中，CD4+T細胞可能構成了占主導地位的效應臂。因此，最佳的抗腫瘤免疫反應可能需要同時激活的CD4+和CD8+T細胞的免疫反應臂。

內源表達的抗原，如DC表達的抗原與mRNA共轉染，將被優先引導到I類加工途徑以激活CD8+T細胞的免疫反應臂。在細胞質內合成后被運送到溶酶體內的抗原的亞型可產生用于裝載II類分子的小肽，刺激微弱的CD4+T細胞反應，接種mRNA轉染DC通常不會產生強有力的CD4+T細胞反應。MHC?I類陰性腫瘤細胞與II類cDNA表達質粒轉染增強了小鼠的抗腫瘤免疫原性，這可能是由從呈遞II類限制抗原獲得的能力并刺激腫瘤特異性CD4+T細胞應答引起的。恒定鏈的共表達、II類反式作用因子(CIITA)或者用IFN-γ作用于腫瘤細胞能夠廢除II類轉染腫瘤細胞的免疫原性。這可能是由于在許多腫瘤細胞中，CIITA的表達或者IFN-γ的孵育同時上調了II類小肽和恒定鏈的表達。這一結果反映了li的自然作用是用來防止內涵體或高爾基體中內源性派生II類小肽與新生的II類分子產生聯系。這個結果與在缺少li的情況下，內源性小肽的呈遞更受到能表達II類分子的細胞青睞的結果保持一致。

已有專利公開了一種逆轉錄基因結構，它可與恒定鏈mRNA雜交并抑制其翻譯。對于抗原呈遞細胞，尤其是惡性抗原呈遞細胞，如白血病，淋巴瘤，黑色素瘤，該基因結構很有效性。另有專利公開了MHC?II類抗原呈遞細胞含有能抑制li蛋白表達的寡核苷酸。這些方法對增強內源性抗原的MHC?II類呈遞很有效，但對于抗原呈遞細胞自然產生的抗原卻缺乏效果。因此，需要開發一種新的能夠增強DC細胞對抗原刺激應答產生的方法，以應對各種各樣的腫瘤和傳染性病原體的抗原決定簇。

發明內容

本抗原搭載的DC能被用于激發對抗傳染性因子和腫瘤的保護性免疫。用編碼期望得到的抗原的核酸轉染DC，該DC表達的抗原能夠優先進入I類處理程序以產生有效的CD8+細胞毒T淋巴細胞(CTL)應答。CD4+T細胞應答的產生則受到限制。該發明提供了一種用抗原搭載的DC來增強其對抗原刺激應答的產生方法，該DC的恒定鏈表達受到抑制。

本方法所用DC可以是從病人自身提取的，也可以從配對的捐獻者或者體外細胞培養中獲得。

本發明提供的可增強對抗原刺激應答的方法和反義結構可以優先刺激CD8+T細胞應答。這是用恒定鏈抑制劑處理DC達到的。恒定鏈抑制劑包括任何可以影響DC中li的數量和活性的試劑。Li抑制劑可能通過li的表達下降或者防止li和MHC?II類分子的相互作用來發揮作用。