[發(fā)明專利]一種納豆激酶生產方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310547971.3
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN103602651A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設計）人: 沈建國;鄧啟華;陸英;王艷艷;林智平;賈鳳超
• 申請（專利權）人: 北京燕京啤酒股份有限公司;北京燕京中發(fā)生物技術有限公司
• 主分類號: C12N9/56
• 分類號: C12N9/56;C12R1/125
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 張文寶

技術領域

本發(fā)明屬于微生物技術領域，特別涉及一種納豆激酶的生產方法。具體說，利用納豆芽孢桿菌及液體發(fā)酵工藝生產納豆激酶。

背景技術

納豆作為一種具有兩千年歷史的傳統(tǒng)食品，具有防止骨質疏松和促凝血、抗致病菌、延緩衰老、防癌抗癌、調整腸功能等多種醫(yī)療保健功效。其中的主要的活性成分——納豆激酶更是以其良好的溶栓特性和安全性引起了廣泛重視。納豆激酶溶栓效果好；來源于食品，無毒副作用；分子量小，易被人體消化吸收，作為一種微生物代謝產物有實現(xiàn)大規(guī)模生產的可能性，具有廣闊的開發(fā)應用前景。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種納豆激酶生產方法，該生產方法是將大豆粉和玉米淀粉經納豆芽孢桿菌液體發(fā)酵，發(fā)酵液經微濾和超濾進行澄清和濃縮，最后經真空冷凍干燥得到成品納豆激酶粉末，其特征在于：包括如下步驟：

1）液體發(fā)酵使用的菌種為納豆芽孢桿菌，名稱為YJND01，分類命名枯草芽孢桿菌（bacillus?subtilis），保藏編號為：CGMCC?No.7516，保藏日期為2013年4月25日，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；

2）以大豆粉及玉米淀粉為原料，采用液體發(fā)酵技術，在50L發(fā)酵罐發(fā)酵：料水比1:10-15，發(fā)酵溫度35-42℃，pH控制在6.8-7.2，納豆芽孢桿菌接種量為2%-5%，通氣量為10-25L/min，發(fā)酵時間不超過24h，發(fā)酵液的納豆激酶酶活（蚓激酶標準）為30-40萬U/mL；

3）將步驟2）得到的發(fā)酵液先經過0.2μm的中空纖維膜進行澄清，再用孔徑10Kda的中空纖維膜超濾濃縮，濃縮倍數5-10倍；

4）將步驟3）得到的濃縮液經真空冷凍干燥后得到納豆激酶粉末，該納豆激酶粉末的酶活力為300-500萬U/g。

所述大豆粉和玉米淀粉均為食品級。

所述大豆粉及玉米淀粉按重量份數配比為1:1-3

本發(fā)明的有益效果是使用的大豆粉和玉米淀粉，原料來源廣泛，二者搭配使用保證了菌種的營養(yǎng)需求，而且發(fā)酵周期短，不超過24h，發(fā)酵液納豆激酶酶活高，達到30-40萬U/mL（蚓激酶標準），能有效的降低生產成本，同時采用的提純和干燥技術也有利于該生產方法的工業(yè)化生產。

具體實施方式

本發(fā)明提供一種納豆激酶生產方法，該生產方法是將大豆粉和玉米淀粉經納豆芽孢桿菌液體發(fā)酵，發(fā)酵液經微濾和超濾進行澄清和濃縮，最后經真空冷凍干燥得到成品納豆激酶粉末，

下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。

實施例1：以大豆粉和玉米淀粉為原料，生產納豆激酶

1.種子液的制備：將斜面菌種接種到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基配方為：營養(yǎng)肉湯，1.5L，經121℃滅菌15min，冷卻至37℃后，接種。種子培養(yǎng)基的發(fā)酵條件為：搖床溫度35℃、轉速150rpm、培養(yǎng)18小時。

2.發(fā)酵：將大豆粉1kg，玉米淀粉1kg加入50L發(fā)酵罐內，并加水溶解后，添加水至25kg，經115℃滅菌20min，冷卻至37℃后，pH控制在7，納豆芽孢桿菌接種量為2%，通氣量為20L/min，攪拌控制在500rpm，發(fā)酵20h后，檢測發(fā)酵液酶活為37.5萬U/mL。

3.發(fā)酵液濃縮：發(fā)酵液首先經過0.2μm的中空纖維膜進行除菌澄清，控制跨膜壓力為5-20psi、流速180ml/min，濾出液再用孔徑10Kda的中空纖維膜超濾濃縮，控制跨膜壓力20-30psi、流速140ml/min，最終控制濃縮倍數在5倍；激酶回收率在80%，激酶活力為150萬U/mL；

4.濃縮液真空冷凍干燥：對濃縮液進行真空冷凍干燥，控制料厚8mm，設定預凍溫度為-40℃，當樣品溫度降到設定溫度后保持2小時，設定升華溫度為5℃，解析溫度為35℃，真空度10pa，干燥時間為20小時,最終含水量2.3%，樣品疏松，復水性好,納豆激酶活力為375萬U/g。

實施例2：以大豆粉和玉米淀粉為原料，生產納豆激酶

1.種子液的制備：將斜面菌種接種到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基配方為：營養(yǎng)肉湯，1.5L，經121℃滅菌15min，冷卻至37℃后，接種,種子培養(yǎng)基的發(fā)酵條件為：搖床溫度37℃、轉速150rpm、培養(yǎng)15小時；