[發(fā)明專利]幾個具有強殺蟲活性的吲哚咔唑生物堿及產(chǎn)生菌株

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310547718.8
• 申請日: 2013-10-31
• 公開（公告）號: CN104593281A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王林
• 申請（專利權(quán)）人: 王林
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/18;C12P7/66;A01N43/90;A01N37/42;A01P7/04;C12R1/465
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于海洋微生物領(lǐng)域，具體的說是幾種強殺蟲活性吲哚咔唑生物堿及產(chǎn)生菌株，該菌種保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏日期2011年2月25日，保藏編號CGMCC?No.4607，分類命名Streptomyces?nitrosporus。?

背景技術(shù)

我國是農(nóng)業(yè)大國，農(nóng)產(chǎn)品出口在國民經(jīng)濟中占據(jù)重要的比例，近幾年來，國際上對農(nóng)藥殘留問題日益重視，禁用限用的農(nóng)藥越來越多、殘留標(biāo)準(zhǔn)不斷提高，每年因化學(xué)農(nóng)藥殘留問題造成中國農(nóng)產(chǎn)品出口的直接和間接損失都達(dá)幾十億以上。同時，栽培植物現(xiàn)有害蟲抗藥性增加和新害蟲的出現(xiàn)，及國家對具有自主產(chǎn)權(quán)的農(nóng)藥的要求日益提高，也要求不斷研制新的高效低毒的殺蟲劑，從天然產(chǎn)物中開發(fā)高效低毒的新先導(dǎo)化合物是創(chuàng)制新農(nóng)藥的關(guān)鍵。新的農(nóng)藥先導(dǎo)化合物來自生物，與其他生物源農(nóng)藥相比，微生物源農(nóng)藥以其開發(fā)費用低、更容易實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的優(yōu)勢，成為國內(nèi)外開發(fā)新農(nóng)藥的首選資源，尋找微生物源的新結(jié)構(gòu)活性物質(zhì)或已有化合物的新功能是生物農(nóng)藥創(chuàng)制的重要途徑。?

由于害蟲對栽培植物的影響比病害更顯著，市場對殺蟲劑的需求更強烈，但現(xiàn)有的農(nóng)藥研發(fā)中，獲得強殺蟲先導(dǎo)化合物的機率，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于抑菌活性的先導(dǎo)化合物，即強殺蟲活性的化合物較難在自然界獲得，急需開發(fā)新資源，陸地微生物研究較早，發(fā)現(xiàn)新的農(nóng)用微生物資源的機率明顯減少，海洋特殊的生境決定了微生物的代謝類型不同于陸地微生物，發(fā)現(xiàn)新農(nóng)藥化合物的機率將會大大增加，海洋微生物成為發(fā)現(xiàn)新農(nóng)藥用化合物新資源而備受關(guān)注。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供幾個具有強殺蟲活性的吲哚咔唑生物堿制備方法，同時提供產(chǎn)生此類化合物的海洋生境鏈霉菌CQT14-24菌株Streptomyces?nitrosporus及其應(yīng)用，該菌株已于2011年2月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號為CGMCC?No.4607)，該放線菌產(chǎn)生的化合物種類豐富，通過人工培養(yǎng)方法的配方調(diào)節(jié)，可獲得不同類型的藥用活性物質(zhì)，本發(fā)明提供的4個吲哚咔唑生物堿和1個蒽醌類化合物對害蟲的生長、存活與化蛹都具有很強的抑制作用，具?有很好的開發(fā)新殺蟲劑潛力。?

本發(fā)明的目的是由以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，制備了幾種強殺蟲活性吲哚咔唑生物堿和蒽醌化合物，所述的吲哚咔唑生物堿化合物產(chǎn)生菌株CQT14-24，為海洋生境硝孢鏈霉菌Streptomyces?nitrosporeus，，CQT14-24菌株經(jīng)人工培養(yǎng)，得到發(fā)酵物再經(jīng)常規(guī)化學(xué)方法提取，可獲得4個吲哚咔唑生物堿和1個蒽醌類化合物，5個化合物均對多種植物害蟲具有強殺傷作用，其特征包括如下步驟：?

1)以其保藏編號為：CGMCC?No.4607的菌株CQT14-24，置于下述固體培養(yǎng)基培養(yǎng)5天，再轉(zhuǎn)入相同配方的發(fā)酵液中發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方為：可溶性淀粉15-20g，黃豆浸汁150-200ml，海泥浸汁100-150ml，KNO₃1.1-1.5g，K₂HPO₄0.4-0.8g，MgSO₄0.5-0.8g，NaCl，12-20g，KCl0.04-0.09g，MgCl₂0.23-0.50g，F(xiàn)eSO4·7H₂O0.01-0.03g，復(fù)合維生素1mL/L，水650-750ml，pH7-7.5，不加瓊脂為培養(yǎng)液，加瓊脂16-19g為固體培養(yǎng)基，25℃-26℃轉(zhuǎn)速150rpm，振蕩培養(yǎng)11天獲得發(fā)酵物，發(fā)酵物分為菌體和菌液；?

2)菌液減壓濃縮后用乙酸乙酯萃取3次，旋蒸后得浸膏；菌體乙酸乙酯超聲提取，浸膏薄層分析后與菌液浸膏合并，減壓柱層析，石油醚：丙酮(20：1)，二氯甲烷：甲醇(1：1)，甲醇分別洗脫，將二氯甲烷：甲醇上ODS柱分離純化，分別用甲醇：水(2：3)以及100％甲醇洗脫，用凝膠柱層析、HPLC色譜常規(guī)分離技術(shù)得到4個吲哚咔唑生物堿和1個蒽醌化合物。?

所述的5個化合物的結(jié)構(gòu)為Des(hydroxyimino)-TAN1030A(1)、holyrine?A(2)、RK-1409(3)、Streptocarbazoles?B(4)、K1115A(5)，其中化合物1-4為吲哚咔唑生物堿，5為蒽醌類化合物。?