[發明專利]一種幾丁質脫乙酰基酶及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201310547193.8
• 申請日: 2013-11-06
• 公開（公告）號: CN104630193A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 張繼泉;桂天書;孫玉英;王婧;相建海
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12N9/80
• 分類號: C12N9/80;C12N15/55;C12N15/70;C12P19/26;C12R1/085
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種幾丁質脫乙酰基酶，其特征在于，蠟狀芽孢桿菌（Bacillus?cereus?ATCC10987）幾丁質脫乙酰基酶（chitin?deacetylase，CDA）核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2所示，或者

在SEQ?ID?NO.2中限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或者幾個氨基酸且仍具有幾丁質脫乙酰基酶活性的由SEQ?ID?NO.2衍生出來的蛋白質。

2.權利要求1所述幾丁質脫乙酰基酶，其特征在于：所述幾丁質脫乙酰基酶編碼的基因核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1所示。

3.按權利要求1所述的幾丁質脫乙酰基酶的構建方法，其特征在于：

1）構建幾丁質脫乙酰基酶重組表達載體質粒pCT7-CHISP6H-BcCDA；

2）將步驟1)所得重組表達載體質粒導入大腸桿菌宿主細胞（BL21(DE3)），進行誘導表達，獲得表達產物；

3）以金屬螯合層析柱分離純化步驟2)所得到的重組蛋白，即SEQ?ID?NO.2中氨基酸所示的重組幾丁質脫乙酰基酶；或者

在SEQ?ID?NO.2中限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或者幾個氨基酸且仍具有幾丁質脫乙酰基酶活性的由SEQ?ID?NO.2衍生出來的蛋白質。

4.按權利要求2所述的幾丁質脫乙酰基酶的構建方法，其特征在于：

所述步驟3）中以金屬螯合層析柱一步法純化獲得電泳純的SEQ?ID?NO.2中氨基酸所示的重組幾丁質脫乙酰基酶。

5.按權利要求1所述的幾丁質脫乙酰基酶的應用，其特征在于：所述重組幾丁質脫乙酰基酶可用于制備殼聚糖。