[發(fā)明專利]云芝及含有云芝的制劑的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310546455.9
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103604879B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韋紅言;溫慶偉;周永強(qiáng);覃艷霞;寧平行
• 申請（專利權(quán)）人: 培力（南寧）藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11350
• 代理人: 羅保康

1.一種云芝及含有云芝的制劑的檢測方法，其特征在于云芝及含有云芝的制劑采用醇沉提取粗多糖，用酸水解多糖成單糖碎片，再對單糖衍生反應(yīng)制成供試品溶液，采用超高效液相色譜法或/和高效液相色譜法檢測供試品溶液中的甘露糖、葡萄糖、半乳糖和巖藻糖的單糖碎片的特征圖譜及其各單糖的含量，建立特征圖譜，通過各單糖的特征峰的相對保留時間或/和峰面積以及含量來控制和評價云芝藥材及其制劑的質(zhì)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝及含有云芝的制劑的檢測方法，其特征在于：所述的供試品溶液的制備方法是：

取云芝藥材3～6g，加水適量，加熱回流提取，提取液離心，量取適量提取液,減壓濃縮至適量，或取云芝制劑0.5～1g，加水使溶解；加入3～6倍體積的無水乙醇，分取沉淀，沉淀加水溶解，并加入重量含量10%的稀硫酸，100-120℃加熱回流水解5-6小時，水解后溶液調(diào)pH至中性并定容，吸取上清液，置具塞試管中，加入0.5mol/L?的NaOH溶液和PMP的甲醇溶液，于60～80℃衍生化反應(yīng)30-60min，反應(yīng)完全后調(diào)pH至中性并定容，取上清液加等體積三氯甲烷振搖提取，棄去有機(jī)溶液，重復(fù)操作3次，水溶液減壓濃縮至適量用乙腈定容，作為供試品溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝及含有云芝的制劑的檢測方法，其特征在于，所述的超高效液相色譜檢測條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流速為0.3～1.0毫升/分鐘；檢測波長245nm；以乙腈為流動相A，以磷酸緩沖鹽溶液為流動相B，進(jìn)行流動相梯度洗脫；

所述的磷酸緩沖鹽溶液配置方法：稱取K₂HPO₄?4.4g，加水800mL溶解，加磷酸調(diào)pH至6.5，并加水稀釋至1000mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝及含有云芝的制劑的檢測方法，其特征在于：所述的高效液相色譜檢測條件是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流速為0.8～1.5毫升/分鐘；檢測波長245nm；以乙腈為流動相A，以磷酸緩沖鹽溶液（稱取K₂HPO₄?4.4g，加水800mL溶解，加磷酸調(diào)pH至6.5，并加水稀釋至1000mL）為流動相B，進(jìn)行流動相梯度洗脫。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝及含有云芝的制劑的檢測方法，其特征在于：所述的特征圖譜的建立方法是：取D-甘露糖、D-葡萄糖、半乳糖和L-巖藻糖對照品適量，加水溶解，按權(quán)利要求2所述的“供試品溶液”的衍生方法制備混合對照品溶液，分別精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液，注入液相色譜儀，測定各單糖含量；供試品溶液的特征圖譜中應(yīng)呈現(xiàn)甘露糖、葡萄糖、半乳糖、巖藻糖4個特征峰，其應(yīng)分別與相應(yīng)的參照物峰的保留時間相一致，以其中任意一個參照物峰相對應(yīng)的峰為S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間、相對峰面積，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±5～10%范圍之內(nèi)，相對峰面積可上下浮動10～30%。