[發明專利]甘草酸酶聯免疫檢測技術

無效

• 申請號: 201310545051.8
• 申請日: 2013-11-02
• 公開（公告）號: CN103613667A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 彭勵;宋孚洋;張東濤;李宏福;任樹勇;鄭麗萍
• 申請（專利權）人: 寧夏大學
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;G01N33/577;G01N33/543
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1.甘草酸酶聯免疫檢測技術，其特征在于它采用鼠源單克隆抗體技術，主要步驟包括：(1)、免疫原與包被原的合成與鑒定：采用活性酯發分別了免疫抗原和包被抗原，采用紫外掃描法檢測合成抗原的性質；(2)、進行動物免疫：用合成的免疫原GA-KLH免疫Blab/c小鼠，通過3次加強免疫后斷尾取血，血清效價均大于1∶16000，經過融合，篩選出陽性細胞株，經過三次亞克隆化后陽性率達100％，獲得能穩定分泌甘草酸單克隆抗體的雜交細胞株，將其命名為3D6，經過7代培養，細胞的生長狀態良好，表明該細胞穩定性良好，可以用來穩定生產甘草酸單克隆抗體；(3)、制備雜交瘤細胞：取準備好的脾細胞與骨髓瘤細胞融合后，應用間接ELISA和間接競爭ELISA方法進行篩選鑒定，陽性抑制滿足要求的細胞株，進行亞克隆，獲得大量雜交瘤細胞；(4)、抗甘草酸單克隆抗體制備：取雌性小鼠5只，腹腔注射無菌液體石蠟0.5～1mL，7～10d后腹腔注射雜交瘤細胞1～5×106pfu/只，8～13d后待小鼠腹部明顯膨大后采集腹水，待3～4d腹水再次積聚后，同法收集腹水；(5)、甘草酸單克隆抗體的初步鑒定：通過間接競爭ELISA測定抗體的抑制效果，甘草酸標準品用PBS按0、1、3、9、27、81μg/L稀釋成5個濃度梯度，用已建立的間接競爭ELISA所測A值計算各濃度的抑制率。