[發(fā)明專利]一種魚皮抗凍蛋白及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310542186.9
• 申請日: 2013-11-05
• 公開（公告）號: CN103555803A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅永康;沈慧星
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;C12N1/04;A23G9/38;A23B4/20
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水產(chǎn)食品加工領(lǐng)域，具體地，涉及一種以魚皮為原料制備抗凍蛋白的方法，由該方法得到的魚皮抗凍蛋白，以及該魚皮抗凍蛋白的應(yīng)用。

背景技術(shù)

抗凍蛋白（Antifreeze?Protein,AFP），又稱熱滯蛋白（Thermal?Hysteresis?Protein,THP），冰結(jié)合蛋白（Ice?Binding?Proteins）或冰晶組織蛋白（Ice?Structuring?Proteins）。抗凍蛋白能通過與特定的冰晶表面結(jié)合，非依數(shù)性地降低溶液的冰點或者抑制冰晶生長，具有低溫保護功能。抗凍蛋白可用于人體或動物器官的超低溫保存，改善其冷凍質(zhì)量；可提高特定微生物的抗凍能力，減小食品凍藏時冰晶的形成和重結(jié)晶對食品結(jié)構(gòu)的破壞，改善食品品質(zhì)。抗凍蛋白可作為一種高級防凍劑應(yīng)用，在醫(yī)學(xué)、化妝品、生物和食品領(lǐng)域均有廣泛的應(yīng)用價值。

目前關(guān)于抗凍蛋白開發(fā)的國內(nèi)外專利申請情況來看，國外專利申請方面，如：（1）JP2003057888公開了一種在低溫下培養(yǎng)擔(dān)子菌類而從其培養(yǎng)液中分離純化高活性抗凍蛋白的方法；（2）JP2003142850公開了一些低值魚類血中的抗凍蛋白以及它們的氨基酸序列和堿基序列；（3）EP9301969公開了一種獲得抗凍蛋白基因的方法，并利用其在酵母中的表達生產(chǎn)抗凍蛋白多肽，而含有抗凍多肽的酵母可以用在冷凍面團等的生產(chǎn)中。

國內(nèi)已有從小麥麩皮、沙冬青、牛皮、豬皮、昆蟲中提取制備抗凍蛋白的相關(guān)專利申請，如：（1）CN200810072986.8（公開號：CN101392019A，公開日：2009年3月25日）公開了一種由采樣、研磨、提取總蛋白、離子交換層析初步分離抗凍蛋白、凝膠過濾系統(tǒng)再次分離抗凍蛋白及脫鹽等步驟組成的提取分離沙冬青葉片抗凍蛋白的方法；（2）CN200610166427.4（公開號：CN1995062A，公開日：2007年7月11日）公開了一種經(jīng)水提取、硫酸氨沉淀、離子交換色譜、凝膠過濾色譜和冷凍干燥等步驟，分離得到小麥麩皮抗凍蛋白的方法；（3）CN201010277569.4（公開號：CN101921328A，公開日：2010年12月22日）公開了一種由堿性蛋白酶酶解牛皮膠原蛋白制備得到的特異性抗凍多肽的氨基酸全序列：Gly-Glu-Arg-Gly-Phe-Pro-Gly-Glu-Arg-Gly-Ser-Pro-Gly-Ala-Gln-Gly-Leu-Gln-Gly-Pro-Arg；（4）CN201010277410.2（公開號：CN101921311A，公開日：2010年12月22日）公開了一種由木瓜蛋白酶酶解牛皮膠原蛋白制備的特異性抗凍多肽的氨基酸全序列：HyP-Gly-Met-Hyl-Gly-His-Arg–Gly；（5）CN200380107092.3（公開號：CN1729295，公開日：2006年2月1日）公開了一種通過降低蛋白糖基化程度來提高III型抗凍蛋白特異活性的方法；（6）CN201110091198.5（公開號：CN102177872A，公開日：2011年9月14日）公開了一種昆蟲抗凍蛋白源的獲取方法；（7）CN200780008726.8（公開號：CN101400695，公開日：2009年4月1日）公開了一種來自甲殼類的具有抗凍活性的蛋白質(zhì)的制備方法；（8）CN97181371.X（公開號：CN1244895，公開日：2000年2月16日）公開了一種胡蘿卜抗凍多肽的制備方法。

目前國內(nèi)外未見利用魚皮資源制備抗凍蛋白及蛋白多肽的文獻報道，若能開發(fā)出一種利用魚皮資源制備抗凍蛋白，并且簡單高效的方法，得到的抗凍蛋白具有特定抗凍功能，勢必將會有巨大的應(yīng)用前景和市場價值。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于，提供一種魚皮抗凍蛋白的制備方法。

本發(fā)明的另一目的在于，提供一種由所述方法得到的魚皮抗凍蛋白。

本發(fā)明的又一目的在于，提供所述魚皮抗凍蛋白的應(yīng)用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的魚皮抗凍蛋白的制備方法，包括以下步驟：

（1）將魚皮打漿，得到的魚皮漿與水混合后磨成魚皮漿液；將所述魚皮漿液（研磨后的）離心，去除上層脂肪，得到去脂魚皮漿液；

（2）將所述去脂魚皮漿液進行超聲波處理；

（3）將超聲波處理后的去脂魚皮漿液與復(fù)合蛋白酶混合，進行酶解反應(yīng)；然后保溫、冷卻并離心，收集上清液；

（4）將所述上清液經(jīng)過超濾處理，得到魚皮蛋白液；

（5）將所述魚皮蛋白液通過濃縮、冷凍干燥，得到所述魚皮抗凍蛋白。