[發明專利]一種魚皮抗凍蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310542186.9
• 申請日: 2013-11-05
• 公開（公告）號: CN103555803A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 羅永康;沈慧星
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;C12N1/04;A23G9/38;A23B4/20
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種魚皮抗凍蛋白的制備方法，包括以下步驟：

（1）將魚皮打漿，得到的魚皮漿與水混合后磨成魚皮漿液；將所述魚皮漿液離心，去除上層脂肪，得到去脂魚皮漿液；

（2）將所述去脂魚皮漿液進行超聲波處理；

（3）將超聲波處理后的去脂魚皮漿液與復合蛋白酶混合，進行酶解反應；然后保溫、冷卻并離心，收集上清液；

（4）將所述上清液經過超濾處理，得到魚皮蛋白液；

（5）將所述魚皮蛋白液通過濃縮、冷凍干燥，得到所述魚皮抗凍蛋白。

2.根據權利要求1所述的魚皮抗凍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，水的用量為魚皮漿重量的1.0～3.0倍；將魚皮漿液通過4000～6000克離心5～15分鐘，優選8～12分鐘。

3.根據權利要求1或2所述的魚皮抗凍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，超聲波處理的時間為10～15分鐘；超聲波功率為700～1000w，頻率為20～25KHz。

4.根據權利要求1～3任意一項所述的魚皮抗凍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述復合蛋白酶的用量為魚皮重量的0.1～0.5%；所述復合蛋白酶包括堿性蛋白酶和中性蛋白酶，堿性蛋白酶和中性蛋白酶的質量比為(1～2):1。

5.根據權利要求1～4任意一項所述的魚皮抗凍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，酶解反應的條件包括：溫度為45～55℃，pH值為7.0～8.0，反應時間為0.3～1.5小時；pH值優選7.2～8.0，反應時間優選0.5～1.0。

6.根據權利要求1～5任意一項所述的魚皮抗凍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，在90～95℃下保溫3～5分鐘，冷卻至室溫，并且在4000～6000克條件下離心5～10分鐘。

7.根據權利要求1～6任意一項所述的魚皮抗凍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟（4）中，超濾處理為：先后利用孔徑為0.5μm和0.2μm的陶瓷膜進行超濾。

8.由權利要求1～7任意一項所述方法制備得到的魚皮抗凍蛋白，分子量為8000～15000道爾頓；其中蛋白質含量大于90%，優選93～95%。

9.一種抗凍保護劑，包含權利要求8所述的魚皮抗凍蛋白，其特征在于，魚皮抗凍蛋白在抗凍保護劑中的重量百分含量為2～6%，優選3～5%，更優選5%。

10.權利要求8所述的魚皮抗凍蛋白和權利要求9所述的抗凍保護劑在微生物或冷凍食品的低溫冷凍保護中的應用。