[發明專利]用于桿狀病毒滴度測定的重組細胞系及其測定方法

有效

• 申請號: 201310538492.5
• 申請日: 2013-11-04
• 公開（公告）號: CN103571795A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 鄧菲;鄧馬平;張艷芳;王華林;胡志紅
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢病毒研究所
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;C12Q1/70;C12Q1/02;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

1.用于桿狀病毒滴度測定的重組細胞系，其特征在于，該重組細胞系保藏在中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為：CCTCC?No.C2013133；其保藏命名為：攜帶P基因的斜紋夜蛾卵巢細胞系Sf9-p。

2.權利要求1所述的用于桿狀病毒滴度測定的重組細胞系的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

構建報告質粒；所述報告質粒包括其中插入了編碼綠色熒光蛋白的報告基因、誘導所述報告基因表達的所述桿狀病毒的晚期基因的啟動子P基因；

利用所述報告質粒轉染Sf9昆蟲細胞；

將轉染后的所述Sf9昆蟲細胞用含有博來霉素以及胎牛血清的培養基篩選，得到單細胞克隆；

將所述單細胞克隆繼續用含有博來霉素的培養基篩選，得到重組細胞系。

3.根據權利要求2所述的用于桿狀病毒滴度測定的重組細胞系的構建方法，其特征在于，在所述利用所述報告質粒轉染Sf9昆蟲細胞的步驟中，

所述轉染的時間為46-50小時。

4.根據權利要求2所述的用于桿狀病毒滴度測定的重組細胞系的構建方法，其特征在于，在所述將轉染后的所述Sf9昆蟲細胞用含有博來霉素以及胎牛血清的培養基篩選，得到單細胞克隆的步驟中，

所述培養基為：含有200ng/ml-800ng/ml的博來霉素以及體積分數為10%的胎牛血清的Grace培養基。

5.根據權利要求1所述的用于桿狀病毒滴度測定的重組細胞系，其特征在于，在所述將所述單細胞克隆繼續用含有博來霉素的培養基篩選，得到重組細胞系的步驟中，

所述博來霉素的濃度為200ng/ml-800ng/ml。

6.一種根據權利要求1所述的重組細胞系測定桿狀病毒的滴度的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將重組細胞系制成細胞懸液；

在待測的桿狀病毒液中加入所述細胞懸液，恒溫培養預定時間后通過觀察熒光情況進行病毒滴度計算，得到滴度。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在所述將重組細胞系制成細胞懸液的步驟中，具體包括：

用Grace培養液將所述重組細胞系稀釋，得到濃度為2×10⁴個/ml到5×10⁴個/ml的所述細胞懸液。

8.權利要求6所述的方法，其特征在于，在所述將重組細胞系制成細胞懸液的步驟中，

所述細胞懸液中加入有卡那霉素和/或鏈霉素。

9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述在待測的桿狀病毒液中加入所述細胞懸液，恒溫培養預定時間后通過觀察熒光情況進行病毒滴度計算，得到滴度的步驟中，具體包括：

在所述待測的桿狀病毒液中加入等量的細胞懸液，在27℃至28℃培養3-5天之后觀察熒光情況進行病毒滴度計算，得到滴度。

10.根據權利要求6-9任一項所述的方法，其特征在于，所述桿狀病毒液包括：

苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒液。