[發明專利]外周血單核細胞基因中mRNA逆轉錄成ＤＮＡ的方法

在審

• 申請號: 201310537861.9
• 申請日: 2013-11-05
• 公開（公告）號: CN103614366A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 辛竹
• 申請（專利權）人: 辛竹
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生化實驗領域，具體涉及外周血單核細胞基因中mRNA逆轉錄成ＤＮＡ的方法。

背景技術

外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血外周血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞?，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中首次提出外周血這一新概念，正常人外周血中一般看不見幼稚的干細胞的,只存在有極少量的造血干細胞，其含量為0.01%左右。如果幼稚細胞的比例大幅增加，有可能是類白血病。正因為存在0.01%的造血干細胞，可利用細胞分離的技術(血細胞自動分離機)，將外周血中含有造血干細胞的單個核細胞進行分離保存，重復數次達一定細胞數量后，回輸給患者以之代替骨髓而進行的干細胞移植，稱為外周血干細胞移植。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于，針對現有技術缺陷，提供一種技術方案：

外周血單核細胞基因中mRNA逆轉錄成ＤＮＡ的方法，步驟如下：首先將目標片段選取模版，然后在ＰＣＲ試管中配置反應體系；混合搖勻，高速離心；烤箱中孵育３分鐘，溫度為７０－７５攝氏度；冰上冷卻１分鐘；微量離心機簡短離心；放入三倍體積的緩沖液以及核糖核酸酶抑制劑、逆轉錄酶分別2倍體積；再次孵育，時間1-1.5小時；直接取至冰上，冷卻3-5分鐘后高速離心，于零下50-80溫度下保存即可。

本發明中，再次孵育之前需要加入無水乙醇1-1.5倍體積。

本發明的有益效果是：操作簡單，成本較低，純度較高，再現性強，數據精確。

具體實施方式

外周血單核細胞基因中mRNA逆轉錄成ＤＮＡ的方法，步驟如下：首先將目標片段選取模版，然后在ＰＣＲ試管中配置反應體系；混合搖勻，高速離心；烤箱中孵育３分鐘，溫度為７０攝氏度；冰上冷卻１分鐘；微量離心機簡短離心；放入三倍體積的緩沖液以及核糖核酸酶抑制劑、逆轉錄酶分別2倍體積；再次孵育，時間1.2小時；直接取至冰上，冷卻4.5分鐘后高速離心，于零下50-80溫度下保存即可，再次孵育之前需要加入無水乙醇1-1.5倍體積。以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。