[發明專利]用于檢測EGFR基因熱點突變的引物、試劑盒和檢測方法

無效

• 申請號: 201310537369.1
• 申請日: 2013-11-04
• 公開（公告）號: CN103602734A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 梁超;熊凱;程宇;邢軍英;劉曉峰;侯然;朱立文;王緒華;方國偉;黃士昂;陳忠
• 申請（專利權）人: 北京海思特臨床檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 陸軍

1.一種引物，其特征在于，所述引物序列如下：

SEQ?ID?NO:15’-ATCCCAGAAGGTGAGAAAGATAAAATTC-3’

SEQ?ID?NO:25’-CCTGAGGTTCAGAGCCATGGA-3’

SEQ?ID?NO:35’-AGAGCCATGGACCCCCACAC-3’

SEQ?ID?NO:45’-CGAAGCCACACTGACGTGC-3’

SEQ?ID?NO:55’-CGAAGGGCATGAGCCGC-3’

SEQ?ID?NO:65’-CCTCCAGGAAGCCTACGTGA-3’

SEQ?ID?NO:75’-CAGCCAGGAACGTACTGGTGA-3’

SEQ?ID?NO:85’-TCCCTGGTGTCAGGAAAATGCT-3’

SEQ?ID?NO:95’-CGCAGCATGTCAAGATCACAGAT-3’。

2.一種包括有權利要求1所述的引物的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：1）引物，所述引物序列如SEQ?ID?NO:1～SEQ?ID?NO:9所示，PCR?MIX反應液，針對不同突變進行酶切的限制性內切酶，BSA溶液，酶切緩沖液，陰性對照品，陽性對照品，去離子水；2）分隔并集中包裝這些試劑的瓶或管以及包裝盒。

3.按照權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述引物的濃度均為5～10μmol/L。

4.按照權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述PCR?MIX反應液包括Taq?DNA聚合酶、dNTPs和MgCl2；其中，所述Taq?DNA聚合酶的濃度為50U/ml，所述dNTPs包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP，它們的濃度均為400μM，所述MgCl2的濃度為3mM。

5.按照權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述限制性內切酶分別為Mse?Ⅰ、BstU?Ⅰ、Nla?Ⅲ、Msc?Ⅰ和Sau96?Ⅰ，上述限制性內切酶的濃度均為5000U/ml。

6.按照權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述酶切緩沖液中的各組分的摩爾濃度或者質量濃度如下：500mM?NaCl、1000mMTris-HCl、100mMMgCl2、0.25%Trito-X-100。

7.按照權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述陽性對照品為：EGFR19缺失型DNA，EGFR20T790M突變型DNA，EGFR21L858R突變型DNA；所述陰性對照品為：EGFR19野生型DNA，EGFR20野生型DNA，EGFR21野生型DNA。