[發明專利]一步酶法制備7-氨基頭孢霉烷酸并獲得a-氨基己二酸的方法

有效

• 申請號: 201310533202.8
• 申請日: 2013-10-31
• 公開（公告）號: CN103555807A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 朱彥民;王喜軍;劉治林
• 申請（專利權）人: 哈藥集團制藥總廠
• 主分類號: C12P35/06
• 分類號: C12P35/06;C12P35/02;C12P13/04
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為;孟旭

技術領域：

本發明涉及一種酶裂解法的應用，具體而言是涉及一種獲制備7-氨基頭孢霉烷酸并獲得α-氨基己二酸的一步酶法應用。?

背景技術：

7-氨基頭孢霉烷酸（7—aminocephalosporanic?acid，7-ACA），?

結構式：?

是目前半合成頭孢菌素的重要基礎原料，目前工業上通常由頭孢菌素C(CephalosporinC,CPC)，通過化學法或二步酶法裂解，脫去7-位的D-α-氨基己二酰側鏈得到7-ACA。?

α-氨基己二酸?

α-氨基己二酸（α-Aminoadipic?acid），分子量161.16，分子式C6H11N1O4，白色結晶體或者白色結晶粉末。最早發現于玉米種子或者人、天竺鼠的尿中。屬于氨基酸的一種，廣泛用于醫藥、食品飼料、化妝品工業等領域，也可以用于合成特殊化學物質的中間體。如低熱質甜味劑，螯合物及多肽等。?

化學法生產7-ACA，有著大量排泄環境污染物質的致命缺陷，這與今日的環境保護概念格格不入，在制備7-ACA后生成大量的α-氨基己二酸甲酯，水解后形成α-氨基己二酸殘存在廢液中，可以采用樹脂或者等電點吸附的方式提取回收，但是處理過程相對的繁瑣不經濟。后發展出二步酶法生產7-ACA，頭孢菌素C通過兩個酶，即D-氨基酸氧化酶及戊二酰7-ACA酰化酶的作用，可以生成7-ACA。如1990年《中國科學報》報導了中國科學院植物生理研究所，以頭孢菌素C為原料，二步酶法制備7-ACA獲得成功。1986年日本有了一步酶法制備7-ACA的專利申請。二步酶法雖然解決了化學法的污染環境問題，但是二步酶法在收率、純度及成本方面顯得有些不足，并且前一步GL-7-ACA的工藝過程較難控制。?

中國專利CN200510089965提供了一種從頭孢菌素Ｃ制備7－氨基頭孢霉烷酸的兩步酶法，其中所用的Ｄ－氨基酸氧化酶為一種經純化的三角酵母Ｄ－氨基酸氧化酶突變體。?

中國專利CN94112285提供一種一步兩酶法從頭孢菌素Ｃ制造7－氨基頭孢霉烷酸的方法。即在一個反應器的水相系統中加入Ｄ－氨基酸氧化酶、ＧＬ－7ＡＣＡ酰化酶。?

中國專利CN200410016825.9以D-氨基酸氧化酶（DAAO）氧化頭孢菌素C生產戊二酰-7-氨基頭孢酶烷酸（GL-7-ACA），再由GL-7-ACA酰化酶催化脫酰生產7-ACA。以及中國專利CN200410039573一種生產7-氨基頭孢烷酸的方法，CN200310113563一種生產7-氨基頭孢烷酸的方法及其專用重組酶公開的方法也存在同樣的問題。?

這些方法雖然一步酶法制備7-氨基頭孢霉烷酸比二步酶法優越，但采用不同的酶其效率具有很大的不同，其具體的處理方法也會對產物的收率和純度產生影響，并沒有涉及α-氨基己二酸的回收和處理，本發明通過現有的工業化的固定化酶，找到一種法兼有了化學法（高收率和高純度）和二步酶法（環保和高收益）的優點，同時給出了一種可以簡單高效的回收α-氨基己二酸的方法，比現有一步酶法獲得的7-ACA更加簡潔，產物收率更高，純度更高，反應條件更加溫和快速，排放的廢水幾乎沒有污染，不但節省了生產成本，保護了環境還創造了新的效益。?

發明內容：

本發明的目的是提供一種制備7-ACA并同時獲得α-氨基己二酸的方法。?

本發明的方法，經過以下步驟：?

步驟1，頭孢菌素C發酵液的處理；?

步驟2，頭孢菌素C在頭孢菌素C酰基轉移酶的作用下進行酶解反應得到7-ACA；?

步驟3，對酶解后得到的7-ACA裂解液進行處理；?

步驟4，分離出7-ACA；?

步驟5，從分離出7-ACA的裂解液中分離α-氨基己二酸。?

其中，步驟1中所述頭孢菌素C發酵液的處理是用堿調pH到堿性，并濃縮到適當濃度及純度。?

步驟2中酶解反應過程要恰當控制反應PH、酶用量等參數，優?選的頭孢菌素C酰基轉移酶購買自山東魯抗立科藥業有限公司。?

步驟3所述對酶解后得到的7-ACA裂解液進行處理是對7-ACA裂解液采用濃縮，脫炭、過濾等措施處理，使其達到結晶前的良好狀態。?

步驟4所述分離出7-ACA采用析晶并分離的方法。?

步驟5所述從分離出7-ACA的裂解液中分離α-氨基己二酸是用等電點法將α-氨基己二酸從裂解液中結晶出來。?

本發明優選的方法，經過以下步驟：?

步驟1，取頭孢菌素C發酵濾液，調pH到9-10。?