[發明專利]一步酶法制備7-氨基頭孢霉烷酸并獲得a-氨基己二酸的方法

有效

• 申請號: 201310533202.8
• 申請日: 2013-10-31
• 公開（公告）號: CN103555807A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 朱彥民;王喜軍;劉治林
• 申請（專利權）人: 哈藥集團制藥總廠
• 主分類號: C12P35/06
• 分類號: C12P35/06;C12P35/02;C12P13/04
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為;孟旭

1.一種制備7-ACA并同時獲得α-氨基己二酸的方法，所述方法，經過以下步驟：

步驟1，頭孢菌素C發酵液的處理；

步驟2，頭孢菌素C在頭孢菌素C酰基轉移酶的作用下進行酶解反應得到7-ACA；

步驟3，對酶解后得到的7-ACA裂解液進行處理；

步驟4，分離出7-ACA；

步驟5，從分離出7-ACA的裂解液中分離α-氨基己二酸。

2.如權利要求1所述的方法，其中，步驟1中所述頭孢菌素C發酵液的處理是用堿調pH到堿性，并濃縮到適當濃度及純度。

3.如權利要求1所述的方法，其中，步驟2中酶解反應過程要控制反應PH、酶用量等參數。

4.如權利要求1所述的方法，其中，步驟3所述對酶解后得到的7-ACA裂解液進行處理是對7-ACA裂解液采用濃縮，脫炭、過濾，使其達到結晶前的良好狀態。

5.如權利要求1所述的方法，其中，步驟4所述分離出7-ACA采用析晶并分離的方法。

6.如權利要求1所述的方法，其中，步驟5所述從分離出7-ACA的裂解液中分離α-氨基己二酸是用等電點法將α-氨基己二酸從裂解液中結晶出來。

7.如權利要求6所述的方法，其中，所述的等電點法將α-氨基己二酸從裂解液中結晶出來的方法，經過以下三個步驟：

步驟1，對一步酶法分離出7-ACA后的裂解液進行處理；

步驟2，分離出α-氨基己二酸；

步驟3，精制α-氨基己二酸；

其中，步驟1所述對裂解液進行處理，包括加堿并濃縮的步驟；步驟2所述分離α-氨基己二酸的方法選自樹脂吸附法或者等電點法；步驟3所述精制α-氨基己二酸是重結晶法。

8.如權利要求6所述的方法，其中，所述的等電點法將α-氨基己二酸從裂解液中結晶出來的方法，經過以下三個步驟：

步驟1，裂解液加入氫氧化鈉溶液，調整PH值為6.0，隨后將裂解液濃縮到原來體積的30%；

步驟2，把濃縮液用酸調節PH值到3.0，析出α-氨基己二酸；

步驟3，將過濾得到的α-氨基己二酸粗品加入水和乙醇的混合溶媒中重結晶一次，結晶用丙酮洗滌，干燥即得精品α-氨基己二酸；

其中，步驟1所述加入氫氧化鈉溶液為2mol/L的氫氧化鈉溶液2mol/L濃度的氫氧化鈉溶液，其配制方法如下：每500毫升水中溶解的氫氧化鈉質量為40g，其中將裂解液濃縮采用的方法如下：把裂解液通過納濾裝置進行濃縮；其中，步驟2所述用酸調節PH值是用鹽酸溶液調節，所述鹽酸溶液濃度為：2mol/L左右，其配制方法如下：36-38%濃鹽酸和水的配比1：5體積進行混合；其中，步驟3所述的重結晶，是用無水乙醇和水1：1等量混合成為50%的乙醇溶液進行重結晶。

9.如權利要求1所述的方法，經過以下步驟：

步驟1，取頭孢菌素C發酵濾液，調pH到9-10；

步驟2，頭孢菌素C酰基轉移酶(NRB103)和頭孢菌素C在室溫下反應，直到用高效液相儀鑒測7-氨基頭孢霉烷酸完全生成，控制反應pH在9-10；

步驟3，向上一步得到的7-氨基頭孢霉烷酸反應液中加入Na₂S₂O₄,調pH6-7，加吐溫80和二氯甲烷，分相，在水相中加入活性炭和EDTA，過濾得7-氨基頭孢霉烷酸液體；

步驟4，7-氨基頭孢霉烷酸液體調pH值使成為酸性，析出結晶后，濾出結晶，用丙酮洗滌，干燥；

步驟5，通過等電點法將α-氨基己二酸從裂解液中結晶出來，方法如下：裂解液加入氫氧化鈉溶液，調整PH值為6.0，隨后將裂解液濃縮到原來體積的30%，把濃縮液用酸調節PH值到3.0，析出α-氨基己二酸，將過濾得到的α-氨基己二酸粗品加入水和乙醇的混合溶媒中重結晶一次，結晶用丙酮洗滌，干燥即得精品α-氨基己二酸。10、如權利要求1所述的方法，經過以下步驟：

取頭孢菌素C(CPC)發酵濾液10升（750mM,相當于純CPC311克），過1μm膜濾，用氨水調PH到10；

向反應器中加入（NRB-103）酶1800克，水洗二次，加入CPC液后，快速攪拌下，用氨水控制PH為8-10，反應30分鐘，7-ACA轉化率98%；

向得到的15升7-ACA液中加入100克Na₂S₂O₄,用氨水調PH為7，加吐溫80，10毫升，加入二氯甲烷2000毫升，攪拌10分鐘，分相，在水相中加入活性炭20克，加入EDTA10克，攪拌15分鐘，過濾除炭得7-ACA處理液；

向7-ACA處理液中滴加3摩爾的鹽酸,使PH為5，結晶完全后，濾出結晶，收集過濾母液，之后300毫升丙酮洗滌結晶，真空干燥至干，重量收率63.7%，純度99.5%；

取經過一步酶法制備7-ACA的廢液15升，用氫氧化鈉調節PH值到6，經過納濾濃縮到5升，滴加3摩爾的鹽酸,使PH為3.0，使α-氨基己二酸結晶，過濾100毫升丙酮洗滌，真空干燥，烘干，干燥后α-氨基己二酸結晶加入水200毫升加入乙醇200毫升攪拌過濾得到純度99%淡黃色α-氨基己二酸大約100克。