[發明專利]啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測

在審

• 申請號: 201310531168.0
• 申請日: 2013-11-01
• 公開（公告）號: CN104592327A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 懷其勇;李陽;馬慶林
• 申請（專利權）人: 山東大學（威海）
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07H1/08;G01N21/31
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明屬藥物及天然產物化學領域，具體涉及啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測。

背景技術

啤酒花為大麻科葎草屬多年生蔓性草本植物，雌雄異株，主要用于啤酒釀造工業，但其藥用價值也不容忽略。其主要活性成分有以葎草酮類和蛇麻酮類為主的樹脂類成分和其衍生物，黃腐酚、異黃腐酚為代表的多酚類化合物以及以萜烯類和萜烯類氧化物為主的揮發性風味成分。最近研究表明，啤酒花水提取物富含豐富的黃酮苷。

黃酮苷是一大類天然化學產物，在植物界分布廣泛。據研究報道，它不僅能作為防治心腦血管疾病的藥物，而且有明顯的抗脂質過氧化、抗衰老、清除自由基，降血脂、降低膽固醇、降血糖，抗癌防癌、免疫調節等生理活性，是一種在人類的營養、健康和防治疾病方面有著廣闊應用前景的藥物，也是應用廣泛的天然抗氧劑和防腐劑，可用于保健食品和化妝品，因此具有很好的開發應用價值。

具有抗過敏活性的黃酮苷類物質可以用于例如過敏性皮炎、支氣管哮喘、過敏性鼻炎、血管性浮腫、特應性疾病、過敏性接觸性皮炎、花粉病、蕁麻疹等各種過敏性的預防或癥狀的緩解?？梢宰鳛槭称诽砑游飺饺氲教囟ū＝∮檬称?、特殊營養食物、營養輔助食品、健康食品、功能性食品和病人用食品等飲食品中，可以作為化妝品添加物添加到皮膚護理制品、粉底和彩妝制品等化妝品中。

具有抗氧化活性的黃酮苷類物質可以用于提高機體抗氧化能力、抵消或吸收自由基、修復機體氧化損傷、防治各種老化疾病，例如常見的癌癥、動脈硬化、糖尿病、白內障、心血管病、老年癡呆、關節炎等?？梢杂糜诳寡趸称贰⒖寡趸瘖y品等。

啤酒花中含有大量的黃酮苷類化合物，但目前國內未見有對啤酒花中黃酮苷（蘆丁、異槲皮苷）的制備方法及抗過敏、抗氧化活性檢測方面的報道。

發明內容

針對上述情況，為克服現有技術缺陷，本發明的目的在于提供一種從啤酒花中提取蘆丁、異槲皮苷的制備方法及對其抗過敏活性、抗氧化性進行檢測的技術方案。具有工藝操作簡單、生產成本低、收率及純度高等優點。同時具有很好的抗過敏和抗氧化活性的蘆丁、異槲皮苷亦可作為藥物前體進行研究，具有很好的藥用價值與發展前景。

所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法，包括以下步驟：

（1）原料提?。簩⑵【苹ǚ鬯槌纱址郏凑召|量體積比（kg/L）加入5倍量的冷水，浸泡12小時，

期間超聲提取2次，每次30min，過濾得提取液。共提取2次，合并提取液，濃縮；

（2）初步除雜：將濃縮后得到的提取液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，其中石油醚萃取一次，乙酸乙酯萃取三次。依次除去葉綠素等脂溶性成分、大極性黃酮苷元、小極性的黃酮苷。再用正丁醇對提取液進行萃取，得正丁醇萃取液，減壓濃縮，得正丁醇稠膏；

（3）大孔樹脂分離富集：得到的正丁醇稠膏用水溶解，通過XAD-4大孔樹脂柱色譜分離富集，依次用蒸餾水和30%、50%、70%、100%乙醇進行梯度洗脫。收集50%乙醇部分的洗脫液，減壓濃縮，得到洗脫濃縮液；

（4）反相柱色譜分離純化：將上述得到的流分通過半制備高效液相色譜儀，以甲醇-0.1%冰醋酸水溶液進行洗脫，分別得到蘆丁、異槲皮苷單體。

所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的抗過敏活性、抗氧化性檢測，包括以下步驟：

采用透明質酸酶體外抑制法對蘆丁、異槲皮苷進行抗過敏活性檢測，分析其抗過敏活性；采用DPPH法對蘆丁、異槲皮苷進行抗氧化性檢測，分析其抗氧化性。

所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（1）中，冷水溫度為5~15℃最佳。浸泡階段，4小時后超聲提取1次，8小時后超聲提取1次，12小時后過濾得提取液。按此方法提取2次，效果最佳。

所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（2）中，可用水飽和的正丁醇對提取液進行萃取。減壓濃縮階段，當正丁醇很難蒸出時，可以加適量水，以形成共沸。

??所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（3）中，按柱體積的5%（質量分數）上樣，每個梯度洗脫體積為1.5個柱體積。

所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（5）中，以甲醇-0.1%冰醋酸水溶液(45:55)進行洗脫，紫外檢測波長為350nm，流速為1.0mL/min。