[發明專利]啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測

在審

• 申請號: 201310531168.0
• 申請日: 2013-11-01
• 公開（公告）號: CN104592327A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 懷其勇;李陽;馬慶林
• 申請（專利權）人: 山東大學（威海）
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07H1/08;G01N21/31
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于：

（1）原料提取：將啤酒花粉碎成粗粉，按照質量體積比（kg/L）加入5倍量的冷水，浸泡12小時，期間超聲提取2次，每次30min，過濾得提取液；共提取2次，合并提取液，濃縮；

（2）初步除雜：將濃縮后得到的提取液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，其中石油醚萃取一次，乙酸乙酯萃取三次；依次除去葉綠素等脂溶性成分、大極性黃酮苷元、小極性的黃酮苷；再用正丁醇對提取液進行萃取，得正丁醇萃取液，減壓濃縮，得正丁醇稠膏；

（3）大孔樹脂分離富集：得到的正丁醇稠膏用水溶解，通過XAD-4大孔樹脂柱色譜分離富集，依次用蒸餾水和30%、50%、70%、100%乙醇進行梯度洗脫；收集50%乙醇部分的洗脫液，減壓濃縮，得到洗脫濃縮液；

（4）反相柱色譜分離純化：將上述得到的濃縮液通過半制備高效液相色譜儀，以甲醇-0.1%冰醋酸水溶液進行洗脫，得到蘆丁、異槲皮苷單體；

（5）抗過敏、抗氧化活性檢測：分別采用了透明質酸酶體外抑制法和DPPH法檢測了其抗過敏性和抗氧化活性。

2.如權利要求1所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（1）中，冷水溫度為5~15℃最佳；浸泡階段，4小時后超聲提取1次，8小時后超聲提取1次，12小時后過濾得提取液；按此方法提取2次，效果最佳。

3.如權利要求1所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（2）中，可用水飽和的正丁醇對提取液進行萃取；減壓濃縮階段，當正丁醇很難蒸出時，可以加適量水，以形成共沸。

4.如權利要求1所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（3）中，按柱體積的5%（質量分數）上樣，每個梯度洗脫體積為1.5個柱體積。

5.如權利要求1所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（5）中，以甲醇-0.1%冰醋酸水溶液(45:55)進行洗脫，紫外檢測波長為350nm，流速為1.0mL/min。

6.如權利要求1所述的啤酒花中蘆丁、異槲皮苷的制備方法及其抗過敏、抗氧化活性檢測，其特征在于步驟（5）中，透明質酸酶溶液濃度為1250?uint/mL，?DPPH乙醇溶液濃度為400μM；抗過敏實驗環節，測吸光度時，波長設定為530nm；抗氧化實驗環節，測吸光度時，波長設定為517nm。