[發(fā)明專利]基于表位抗原肽的抗mtDNA抗體酶聯(lián)免疫的檢測(cè)方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310531096.X
• 申請(qǐng)日: 2013-10-30
• 公開（公告）號(hào): CN104597244A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳莊民;陳曉翔;葉霜;張瑱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吳莊民
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/564
• 代理公司: 上海和躍知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31239
• 代理人: 杜林雪

1.一種基于mtDNA為抗原的抗mtDNA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，包括如下步驟：

1）應(yīng)用線粒體分離試劑盒（Thermo）抽提哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞線粒體；

2）應(yīng)用DNA抽提試劑盒（Qiagen）提取線粒體DNA（mtDNA）；

3）DNA凝膠電泳檢測(cè)mtDNA完整性（約16,500bp），NanoDrop^TM1000分光光度儀檢測(cè)mtD?NA濃度（pg/ml）及質(zhì)量（OD260/280>1.8）；

4）用DNA包被液（Pierce）將mtDNA包被于ELISA板上（Nunc），包被濃度為5μg/ml，100μL每孔，4℃過(guò)夜；

5）4℃取出包被板，PBS洗板4次，1%明膠室溫封閉1h；

6）清空封閉液，PBS洗板4次，加入1:100稀釋的待測(cè)血清，室溫孵育1-2h；

7）清空待測(cè)血清，PBS洗板4次，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人免疫球蛋白G（IgG）二抗，室溫孵育1h；

8）清空抗人IgG二抗，PBS洗板5次，加入底物，室溫避光孵育10-15min；

9）加入終止液，酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450nm讀取OD值。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于mtDNA為抗原的抗mtDNA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的應(yīng)用，其特征在于，該方法在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的診斷應(yīng)用，用于判定系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病危重度和轉(zhuǎn)歸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于mtDNA為抗原的抗mtDNA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，包括免疫印跡、免疫發(fā)光和膠體金法。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于抗mtDNA抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法試劑或試劑盒，其特征在于：以線粒體DNA(mtDNA)作為抗原包被ELISA板制得。