[發明專利]一種定點突變改造的三磷酸胞苷合成酶

有效

• 申請號: 201310528691.8
• 申請日: 2013-10-30
• 公開（公告）號: CN103540570A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 應漢杰;朱夢珠;謝婧婧;孫梧進;王艷;郭亭;朱晨杰;陳勇;陳曉春;吳菁嵐
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/30;C12R1/15
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種定點突變改造的三磷酸胞苷合成酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

2.根據權利要求1所述的定點突變改造的三磷酸胞苷合成酶，其特征在于，它是由氨基酸序列為SEQ?ID?NO：4所示的來源于谷氨酸棒桿菌ATCC13032的三磷酸胞苷合成酶進行定點突變改造得到，其第160位氨基酸由天冬氨酸突變成了谷氨酸，第162位氨基酸由谷氨酸突變成了丙氨酸，第168位氨基酸由谷氨酸突變成了賴氨酸。

3.編碼權利要求1所述的定點突變改造的三磷酸胞苷合成酶的基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQ?ID?No：1所示。

4.一種重組質粒，其包含了權利要求3所述的核苷酸序列。

5.一種重組細胞，其包含了權利要求4所述的重組質粒。

6.權利要求1所述的定點突變改造的三磷酸胞苷合成酶在合成三磷酸胞苷中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，用二甲苯處理過的菌體細胞1～2g加到10～15ml全細胞催化反應液中，全細胞催化反應液初始組分如下：以pH7.0～8.0100mmol/L?Tris-HCl緩沖液為溶劑，添加15～30mmol/L谷氨酰胺、20～50mmol/L?ATP、20～50mmo/L?MgSO₄、10～20mmol/L?UTP，0.15～0.3mmol/L?GTP。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，二甲苯的使用重量為菌體細胞重量的1～3%。