[發明專利]一種直鏈聚乙二醇-重組豬α干擾素偶聯物、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201310526045.8
• 申請日: 2013-10-29
• 公開（公告）號: CN103751796A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 王明麗;李增;趙俊;王彩玲
• 申請（專利權）人: 王明麗;李增
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K38/21;A61P31/12
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

1.一種直鏈聚乙二醇-重組豬α干擾素偶聯物，其特征在于它具有如下結構式：

式中，mPEG為聚乙二醇鏈，Protein為N端攜帶標記蛋白重組豬α干擾素（TRX-HIS-Interferon）。

2.根據權利要求1所述的一種直鏈聚乙二醇-重組豬α干擾素偶聯物，其特征在于所述的干擾素是N端攜帶標記蛋白重組豬α干擾素（TRX-HIS-Interferon,Mw=39KD）。

3.根據權利要求1所述的一種直鏈聚乙二醇-重組豬α干擾素偶聯物，其特征在于所述的聚乙二醇部分是分子量為2-30KD的直鏈聚乙二醇。

4.一種如權利要求1所述的直鏈聚乙二醇-重組豬α干擾素偶聯物的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）將干擾素用5mM?pH3.0-5.0的磷酸二氫鉀緩沖液稀釋到0.1mg/ml；

（2）加入計算量的干擾素，用NaOH溶液調節pH值到8.0，冰浴保存，按干擾素：mPEG為1:20的物質的量加入1/4量的mPEG-SC，在0-4℃條件下反應，隨后每間隔2h加入1/4量的mPEG-SC，加入完畢后繼續反應4-8h，所述的mPEG-SC有如下結構：

（3）加入0.75Μ的甘氨酸終止反應；

（4）取上述反應液少許，通過SDS-PAGE計算反應率，隨后進行純化，所述的純化包括以下步驟：

（1）將上述反應液用5-10倍量體積、濃度為50mM?pH7.2的醋酸鈉緩沖液稀釋，然后將稀釋液上羧甲基纖維素柱（Waterman?CM-52），以5倍體積pH7.2的醋酸鈉緩沖液洗柱后，用含0.5M?NaCl的醋酸鈉緩沖液洗脫，收集含PEG-干擾素的洗脫液，濃縮；

（2）用Superdex200對（1）中得到PEG-干擾素進一步純化，洗脫液為pH7.2的醋酸鈉緩沖液（含0.2M?NaCl），收集含PEG-干擾素的洗脫液，濃縮。

5.根據權利要求1所述的直鏈聚乙二醇-重組豬α干擾素偶聯物，其特征在于該藥物可以用在制備獸用抗病毒藥物中。