[發明專利]一種對shRNA干擾片段進行篩選的方法

無效

• 申請號: 201310525126.6
• 申請日: 2013-10-31
• 公開（公告）號: CN103602731A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 徐麗
• 申請（專利權）人: 徐麗
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種實驗方法，具體來說，一種對shRNA干擾片段進行篩選的方法。?

背景技術

核糖核酸（英語：Ribonucleic?acid，縮寫：RNA）是一種重要的生物大分子，因為分子由核糖核苷酸組成而得名。每個RNA分子都由核苷酸單元長鏈組成，每個核苷酸單元含有一個含氮堿基、一個核糖和一個磷酸基。RNA是具有細胞結構的生物的遺傳訊息中間載體，并參與蛋白質合成；還參與基因表達調控。對一部分病毒而言，RNA是其唯一的遺傳物質。RNA存在于一切細胞的細胞質和細胞核中，也存在于大多數已知的植物病毒和部分動物病毒以及一些噬菌體中。嘧啶堿有一個不同：RNA是尿嘧啶，DNA則為胸腺嘧啶。?五碳糖不同：RNA是核糖，DNA是脫氧核糖，這樣一來組成RNA的基本單位就是核糖核苷酸；DNA則為脫氧核苷酸DNA為雙鏈結構，RNA為單鏈結構。?

發明內容

為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案：?

一種對shRNA干擾片段進行篩選的方法，步驟如下：首先建立能夠穩定表達PERV的細胞模型；然后對細胞進行培養，shRNA表達載體轉染細胞，并進行熒光觀察；用熒光定量進行檢測。

本發明中，在對PERV進行培養的時候，需要及時吸取干凈細胞培養液，之后再用洗脫緩沖液進行預熱3-10分鐘。?

本發明中，其特征在于，最后需要在48小時后用熒光顯微鏡觀察細胞轉染效率并收集細胞檢測shRNA的干擾效果。?

?本發明的有益效果是，菌塊能夠徹底混勻，裂解效果良好，提取量和純度都比較高，操作簡便，成本不高。?

具體實施方式

一種對shRNA干擾片段進行篩選的方法，步驟如下：首先建立能夠穩定表達PERV的細胞模型；然后對細胞進行培養，shRNA表達載體轉染細胞，并進行熒光觀察；用熒光定量進行檢測。在對PERV進行培養的時候，需要及時吸取干凈細胞培養液，之后再用洗脫緩沖液進行預熱7分鐘，最后需要在48小時后用熒光顯微鏡觀察細胞轉染效率并收集細胞檢測shRNA的干擾效果。?

?以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。?