[發明專利]同時檢測心型脂肪酸結合蛋白和肌鈣蛋白I的快速定量檢測裝置及檢測方法

在審

• 申請號: 201310524449.3
• 申請日: 2013-10-17
• 公開（公告）號: CN103543272A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 李洲;楊發青;周鴻銳
• 申請（專利權）人: 天津中新科炬生物制藥有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/532
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明專利是涉及醫學臨床診斷技術領域，特別是涉及一種以免疫膠體金快速檢測方法制備的同時檢測心型脂肪酸結合蛋白和肌鈣蛋白I的快速定量檢測裝置及檢測方法。

背景技術

心型脂肪酸結合蛋白(FABP)是心臟中富含的一種新型小胞質蛋白。它具有高度心臟特異性，在心臟以外的組織中只有低濃度表達。心肌缺血性損傷出現后，hFABP可以早在胸痛發作后1-3小時在血液中被發現，6-8小時達到峰值而且血漿水平在24-30小時內恢復正常。心臟脂肪酸結合胞質蛋白由132個氨基酸組成，分子量為15kDa。FABP基因位于染色體I上。它是心臟最豐富的蛋白質之一。FABP的生物學方表現說明其可作為一種對心肌損傷的早期診斷有用的生物標志物。

作為心肌損傷的早期診斷有用的生物標志物，FABP比傳統的肌紅蛋白(MYO)更好，這兩種在心肌和骨骼組織中表達的低分子量胞質蛋白是線粒體氧化的基質而且在癥狀發作后2小時內釋放，6小時出現最大濃度，24小時內恢復基線濃度。然而，他們在心臟和肌肉組織中的濃度不同。FABP濃度比骨骼肌中高2-10倍，與此相反，心臟細胞中肌紅蛋白濃度比骨骼細胞中低2倍。肌紅蛋白的正常血漿濃度比FABP的高10-15倍。因而FABP較肌紅蛋白具有相似的靈敏度和更高的特異性。

肌鈣蛋白是由C，T，I三個亞單位組成的復合體，調節肌肉的收縮和舒張。肌鈣蛋白I是心肌細胞所特有，是復合物中的抑制亞單位，抑制肌球蛋白與肌鈣蛋白連接，有防止肌肉收縮的作用。cTnI分子量為22.5KD，多肽的N端較骨骼肌TnI多26個氨基酸，氨基酸順序差異達40％，因而抗原性與骨骼肌明顯不同。cTnI約3％游離在胞漿內，其余同心肌結構蛋白相結合，當心肌損傷時，游離于胞漿內的cTnI快速釋放入血循環，血清cTnI水平3～5小時升高，其后肌原纖維不斷崩解破壞，cTnI不斷釋出，血清水平于24小時達高峰，5～10天后降至正常，cTnI增高預示著心肌組織的改變。隨著對cTnI深入研究，無論是對心肌的特異性還是診斷敏感性，傳統的肌酸激酶同工酶(CK-MB)的地位都受到了嚴重挑戰.cTn被認為是目前最好的確定標志物，正逐步取代CK-MB成為AMI的診斷“金標準。

目前在急性心梗的快速檢測方面，采用CTNI、CKMB、CTNI聯測是一種常用的方法，然而，如果用FABP和CTNI來替代3聯測，應該具有更好的檢測性能，特別是如果采用定量檢測，將能更全面的反映心肌損傷的狀況。目前尚沒有同時檢測心型脂肪酸結合蛋白和肌鈣蛋白I的快速定量檢測裝置的報道出現。

發明內容

本發明目的是提供一種同時檢測心型脂肪酸結合蛋白和肌鈣蛋白I的檢測裝置及檢測方法，用來檢測血清、血漿和全血樣本中的FABP和CTNI。具有操作簡便、反應快速、結果準確、可信、適合現場檢測等優點。發明內容如下：

一種同時檢測心型脂肪酸結合蛋白和肌鈣蛋白I的快速定量檢測裝置及檢測方法，其特征在于裝置由相互獨立的心型脂肪酸結合蛋白(FABP)和肌鈣蛋白I(CTNI)檢測試紙、雙聯卡殼和內置了相應標準曲線和判定方法的免疫層析結果判讀記錄儀組成。

所述的檢測裝置，其特征在于FABP檢測試劑試紙由含有膠體金標記的抗人FABP抗體的膠體金墊、包被有配對FABP抗體(T線)和抗鼠IgG(C線)的NC膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成。CTNI檢測試劑試紙由含有膠體金標記的抗人CTNI抗體的膠體金墊、包被有配對CTNI抗體(T線)和抗鼠IgG(C線)的NC膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成。每個試紙的寬度為3-5mm，長度為7-8cm。樣品墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊從塑料底板一端依次排列至另一端。

所述的檢測裝置，其特征在于雙聯卡殼包含上蓋和下蓋兩個部分，內部可平行放置兩條檢測試紙。卡殼上蓋的下部對應樣品墊部分設置了樣品孔和稀釋液孔，用于加入樣本和稀釋液，卡殼上蓋的中間部分應對試紙NC膜中部設置了視窗口，用于觀察NC膜上的C、T線，判定結果。

所述的檢測裝置，其特征在于所述NC膜是一種由硝酸纖維素構成的多孔結構的膜，孔徑為8-12um。稀釋液墊為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊為吸水濾紙。

所述的檢測裝置，其特征在于包被有配對抗體的NC膜制備過程為：以0.01M?pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)將配對的FABP或CTNI抗體配制成合適的濃度，在噴膜儀在NC膜上以1.2-1.5ul/cm的參數進行劃線，包被T線，同時在NC膜上部包被1-2mg/ml的抗鼠IgG作為C線。干燥，備用。