[發(fā)明專(zhuān)利]一種血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310520561.X
• 申請(qǐng)日: 2013-10-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103543139A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林居強(qiáng);陳榮;黃祖芳;王靜;陳冠楠;馮尚源;李永增;謝樹(shù)森
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 福建師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/65
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/65
• 代理公司: 福州君誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

1.?一種血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于：

（1）去除血漿高豐度蛋白

取疏水性聚合物于套有離心柱的收集管中，加入洗脫液，充分混勻，3000～6000rpm離心1～5?min后，將收集管中的液體倒掉，重復(fù)三次得到經(jīng)洗脫液洗脫的疏水性聚合物；

取血漿標(biāo)準(zhǔn)樣品，加入1～10倍體積量的洗脫液進(jìn)行稀釋?zhuān)尤氲胶薪?jīng)洗脫液洗脫的疏水性聚合物的離心柱中，利用移液器反復(fù)抽吸充分混勻，置于搖床中200～350?rpm震蕩10～15?min，2000～5000?rpm離心，去除沉淀物，收集上層的低豐度蛋白溶液；

（2）富集血漿低豐度蛋白

取印跡固定化基質(zhì)，與步驟（1）收集到的低豐度蛋白溶液混合，孵育8～15?min，然后將印跡固定化基質(zhì)轉(zhuǎn)入漂洗液中浸泡10～20?min，取出在室溫下吹干備用；

（3）低豐度蛋白SERS增強(qiáng)基質(zhì)混合液的制備

將步驟（2）吹干的印跡固定化基質(zhì)剪碎并收集于離心管中，加入冰醋酸進(jìn)行溶解，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆尸F(xiàn)為透明膠體狀態(tài)時(shí)，加入SERS活性金屬納米粒子，充分?jǐn)嚢瑁?2～65℃孵育15～30?min，靜置分層，直至固相雜質(zhì)析出，制成低豐度蛋白SERS增強(qiáng)基質(zhì)混合液；

（4）血漿低豐度蛋白SERS光譜檢測(cè)

取低豐度蛋白SERS增強(qiáng)基質(zhì)混合液2～20?μl進(jìn)行SERS檢測(cè)；

（5）癌癥判別

取一種未知癌癥類(lèi)型的患者血漿，采用步驟（1）到（4）的操作，得到所述未知癌癥類(lèi)型的癌癥患者的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜數(shù)據(jù)；將該數(shù)據(jù)與已建立的健康人和已知癌癥種類(lèi)的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜數(shù)據(jù)庫(kù)相對(duì)比，判別出未知癌癥的種類(lèi)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述的印跡固定化基質(zhì)與血漿標(biāo)準(zhǔn)樣品混合時(shí)，其比例為（0.2～2）g︰（10～100）μl。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述疏水性聚合物是指離子交換樹(shù)脂或硅膠。

4.?根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述洗脫液是指磷酸鹽緩沖液，磷酸根的濃度范圍為25～60?毫摩爾每升，pH?值為4。

5.?根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述的疏水性聚合物與洗脫液的用量比為(2～25)?g︰(100～1000)?μl。

6.?根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述印跡固定化基質(zhì)是指醋酸纖維素膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚偏二氟乙烯膜。

7.?根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述SERS活性金屬納米粒子是指銀納米粒子或金納米粒子。

8.根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述疏水性聚合物的使用量與血漿標(biāo)準(zhǔn)樣品的用量比為(2～25)?g：(10～100)?μl。

9.?根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述的印跡固定化基質(zhì)與冰醋酸的用量比為(0.2～2?)g?︰(150～1000)?μl。

10.?根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述SERS活性金屬納米粒子與印跡固定化基質(zhì)的用量比為(5～50)毫摩爾：(0.2?~2)?g。

11.?根據(jù)權(quán)利要求1的所述的血漿低豐度蛋白表面增強(qiáng)拉曼光譜的檢測(cè)方法，其特征在于所述的SERS檢測(cè)，使用的激光功率為0.1～20?mW，激光激發(fā)波長(zhǎng)為450～800?nm，光譜的測(cè)量范圍為400～3500?cm?^-1。