[發明專利]家蠶鈣離子-ATP酶基因重組表達載體及其應用

有效

• 申請號: 201310516484.0
• 申請日: 2013-10-28
• 公開（公告）號: CN103555761A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 趙萍;王鑫;謝康;衣啟營;馬三垣;夏慶友
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/04
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.家蠶鈣離子-ATP酶基因重組表達載體，其特征在于，是將由家蠶前部絲腺特異性啟動子、家蠶鈣離子-ATP酶基因CDS序列和終止子組成的表達框插入含熒光報告基因的轉座載體中而制得；所述家蠶鈣離子-ATP酶基因CDS序列如SEQ?ID?No.1所示。

2.如權利要求1所述的家蠶鈣離子-ATP酶基因重組表達載體，其特征在于，所述家蠶前部絲腺特異性啟動子為家蠶表皮蛋白BmCP231啟動子或BmCP274啟動子，所述BmCP231啟動子序列如SEQ?ID?No.4中第1位至第1457位核苷酸所示，或者如SEQ?ID?No.4中第1位至第1511位核苷酸所示；所述BmCP274啟動子序列如SEQ?ID?No.9所示。

3.如權利要求2所述的家蠶鈣離子-ATP酶基因重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體是將由家蠶表皮蛋白BmCP231啟動子、家蠶鈣離子-ATP酶基因CDS序列和SV40終止子組成的表達框插入pBac[3xP3-EGFPafm]載體的Asc?I酶切位點而制得；所述BmCP231啟動子序列如SEQ?ID?No.4中第1位至第1511位核苷酸所示。

4.權利要求1至3任一項所述的家蠶鈣離子-ATP酶基因重組表達載體在提高蠶絲纖維力學性能方面的應用。

5.利用權利要求1至3任一項所述的家蠶鈣離子-ATP酶基因重組表達載體提高蠶絲纖維力學性能的方法，其特征在于，包括以下步驟：將家蠶鈣離子-ATP酶基因重組表達載體與編碼轉座酶的轉基因輔助載體等摩爾比混合，顯微注射入已解除滯育的產卵后2～5小時的蠶卵中，注射后的蠶卵用無毒膠水封口，25℃催青至孵化，孵化出的幼蟲采用人工飼料飼育，至成蟲后進行自交制種，再取卵期第7天的蠶卵，在顯微鏡下進行熒光檢測，篩選出在眼睛或神經特異發射熒光的轉基因個體，獲得轉基因家蠶，其生產的蠶絲纖維即為力學性能提高的蠶絲纖維。