[發明專利]一種與伊犁馬乳用性狀相關的SNP標記及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310514883.3
• 申請日: 2013-10-25
• 公開（公告）號: CN103740805A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 劉武軍;邵勇鋼;王瓊;莫合塔爾·夏甫開提;孟軍;耿明;劉玲玲
• 申請（專利權）人: 劉武軍;新疆農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 烏魯木齊新科聯專利代理事務所(有限公司) 65107
• 代理人: 歐詠

技術領域

本發明涉及動物分子遺傳育種，利用DNA分子標記技術檢測與伊犁馬乳用性狀相關性，選育提高伊犁馬產奶量的方法。?

背景技術

馬奶其性味甘涼，營養價值在各類乳品中是最高，含有蛋白質、脂肪、糖類、磷、鈣、鉀、鈉、維生素A、維生素B1-B2、維生素C、尼克酸、肌醇等多種豐富的維生素和礦物質，容易被人體消化吸收，具有補虛強身、潤燥美膚、清熱止渴的作用，由于馬奶內只含1.5%的脂肪，比牛奶的脂肪含量少了一倍。馬奶發酵釀成的馬奶酒，不但清涼可口，富有營養，還能起到滋脾養胃、除濕、利便、消腫等作用，對治療肺病效果更佳，為此，歐洲還將馬奶酒飲療法作為臨床療法之一，但我國欠缺專門化的乳用馬品種，馬的產奶量遠遠低于牛的產奶量，無法滿足市場需求，因此，多元化發展馬產業、提高我國馬的專門化水平、提供乳用性能突出的馬匹是解決這一問題的有效途徑。?

目前，對分子育種工作理論的研究重點之一是利用目的性狀與標記間的關聯性進行標記輔助選擇，SNP(Single?Nucleotide?Polymorphism,單核苷酸多態性)遺傳標記作為第三階段以DNA測序為核心的分子標記，其特點是單個堿基的置換，不是以長度的差異作為區分的遺傳標記，由于SNP分布密集，隨著越來越多的SNP位點被發現，SNP己成為極具應用前景的遺傳標記物。發現SNP位點是SNP標記的關鍵工作，檢測SNP的方法很多，其中SSCP（Single?Strand?Conformation?Polymorphism，單鏈構象多態性）是近年來發展起來的一種基因多態性檢測技術，即應用PCR-SSCP技術對控制家畜性狀的基因進行分型，聯合經濟性狀的遺傳規律進行分析，可能找到與經濟性狀相連鎖的重要標記基因，做到真正的早期選種、準確選種。PRL(Prolactin，催乳素)和PRLR(Prolactin?Receptor，催乳素受體)主要由垂體的催乳素細胞分泌，廣泛作用于動物的乳腺，刺激乳腺發育、促進泌乳，增強雌性動物的母性行為。近年來，PRL和PRLR基因作為家畜產奶性狀的功能基因，其多態性研究（包括SNP位點的發現）已成為動物遺傳育種研究的熱點之一。?

檢索文獻披露：①Viitala等研究了愛爾夏、芬蘭牛PRLR第3外顯子區域。②張佳蘭對中國、加拿大、澳大利亞等4個奶牛群體研究發現，在第3、5、7、10外顯子區域都發現了多態。③孫瑞萍等在對西農薩能奶山羊PRLR基因外顯子10區域多態性相研究發現多態位點，發現P2、P3和P4擴增片段具有多態性，P1則不存在多態性不同基因型與產奶性狀的最小二乘均值差異顯著。④姚新奎、熱陽古·阿布拉等首次對新疆的伊犁馬、新吉馬及其雜交馬3個品種的PRL和PRLR基因進行多態性研究,結果發現：PRL基因第5外顯子、PRLR基因第4外顯?子存在多態，共發現5種基因型，檢測到3個突變位點（T591G、C654T和C156T）,屬于同義突變。對3個不同品種馬群體PRL外顯子5和PRLR外顯子4多態基因型與產奶量的相關性研究表明:伊犁馬群體內,2個基因不同基因型之間產奶量有顯著差異,但是在新吉馬和雜交馬群體內,不同基因型個體之間產奶量差異不顯著；馬PRL基因外顯子5、PRLR基因外顯子4上的突變可能是影響伊犁馬產奶性能的重要位點。⑤新疆中澳羊中心的賀三剛等申請的專利“伊犁馬育種方法及其試劑盒”（專利申請號：201310040054.6），公開采用該發明的方法和試劑盒能夠顯著提高伊犁馬肉用新類群的體尺性狀，即體高，體長，胸圍和管圍，加速伊犁馬肉用新類群的培育。綜上，國內外多集中在奶牛、奶山羊產奶性狀的功能基因方面的研究報道。?

本發明利用分子標記技術，提供了一種檢測影響伊犁馬乳用性狀產奶量的SNP標記、并以標記輔助選擇策略選育提高伊犁馬產奶量的方法；檢測的SNP標記位于馬第21號染色體上總長度為194bp的第29764417-29764611位堿基之間，在PRLR基因附近，SNP位點為A>G。?

發明內容

本發明的目的在于：提供一種利用分子標記技術檢測影響新疆伊犁馬乳用性狀的SNP標記，并以標記輔助選擇策略選育提高伊犁馬產奶量的方法。?

本發明的目的是這樣實現的：一種與伊犁馬乳用性狀相關的SNP標記及其檢測方法，?

1）提取待測伊犁馬的基因組DNA；根據GenBank登錄號為BIEC2-560774的序列，設計合成引物，上游引物為5'-GGTTGCTATTCTGGGCTTTG-3'，下游引物為5'-TGTGTTGGGATGGACAAAAA-3'；擴增片段大小為194bp，最適退火溫度為57.1℃；?