[發明專利]AG22多肽的完全抗原及其制備方法和抗體

無效

• 申請號: 201310514525.2
• 申請日: 2013-10-25
• 公開（公告）號: CN103524629A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 任培根;郭成志;李健;郭小勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/107;C07K16/18
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 吳平

技術領域

本發明涉及免疫學領域，特別是涉及一種AG22多肽的完全抗原及其制備方法和抗體。

背景技術

骨鈣素蛋白質是由成骨細胞分泌的，其含量隨著年齡的變化而變化，通過血清骨鈣素的含量可以了解成骨細胞的狀態，對于骨質疏松的判定等具有重要的意義。

AG22多肽是小鼠骨鈣素蛋白質分子中的一段保守序列，經過序列分析此段多肽具有抗原性的多肽。然而，AG22多肽自身的免疫原性較低，無法作為完全抗原投入使用。

發明內容

基于此，有必要提供一種AG22多肽的完全抗原。

此外，還有必要提供該AG22多肽的完全抗原的制備方法，以及與該AG22多肽的完全抗原特異性結合的抗體。

一種AG22多肽的完全抗原，所述AG22多肽的完全抗原由AG22多肽和交聯劑活化的匙孔血藍蛋白偶聯形成；

其中，所述AG22多肽的序列為SEQ?ID?No.1所示的序列，所述AG22多肽通過半胱氨酸與所述交聯劑活化的匙孔血藍蛋白偶聯。

在一個實施例中，所述AG22多肽與所述交聯劑活化的匙孔血藍蛋白的摩爾比為800～1000：1。

在一個實施例中，所述交聯劑為馬來酰亞胺。

一種AG22多肽的完全抗原的制備方法，包括如下步驟：

提供交聯劑活化的匙孔血藍蛋白，并用磷酸鈉緩沖液對所述交聯劑活化的匙孔血藍蛋白進行重構，得到重構后的交聯劑活化的匙孔血藍蛋白溶液；

提供AG22多肽，并將所述AG22多肽用偶聯緩沖液或雙蒸水溶解，得到AG22多肽溶液；

將所述重構后的交聯劑活化的匙孔血藍蛋白溶液和所述AG22多肽溶液混勻后充分反應，分離純化后得到由所述AG22多肽和所述交聯劑活化的匙孔血藍蛋白偶聯形成AG22多肽的完全抗原，其中，所述AG22多肽的序列為SEQ?ID?No.1所示的序列，所述AG22多肽通過半胱氨酸與所述交聯劑活化的匙孔血藍蛋白偶聯。

在一個實施例中，所述交聯劑活化的匙孔血藍蛋白溶液的濃度為5mg/mL；

所述AG22多肽溶液的濃度為8mg/mL。

在一個實施例中，將所述重構后的交聯劑活化的匙孔血藍蛋白溶液和所述AG22多肽溶液混勻的操作中，所述AG22多肽與所述交聯劑活化的匙孔血藍蛋白的摩爾比為800～1000：1。

在一個實施例中，所述交聯劑為馬來酰亞胺。

在一個實施例中，分離純化后得到由所述AG22多肽和所述交聯劑活化的匙孔血藍蛋白偶聯形成AG22多肽的完全抗原的操作為：

用30mL含有質量百分數為0.01%的疊氮鈉PBS緩沖液平衡Sephadex?G-25M凝膠柱，接著向所述Sephadex?G-25M凝膠柱加入反應液，用總體積10mL的所述PBS緩沖液洗滌，收集洗出液，每次收集0.5mL～1.0mL，在280nm下測量吸光度值，根據吸光度值收集含蛋白洗脫液。

一種AG22多肽的完全抗原的抗體，所述AG22多肽的完全抗原的抗體與上述的AG22多肽的完全抗原特異性結合。

一種AG22多肽的完全抗原的抗體，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為上述的AG22多肽的完全抗原作為抗原被免疫系統識別后表達得到的抗體，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。

在一個實施例中，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為兔源的多克隆抗體。

這種AG22多肽的完全抗原具有較強的免疫原性，可以作為完全抗原投入使用。這種AG22多肽的完全抗原的抗體可以用于血清或組織中小鼠骨鈣素蛋白質的檢測。

附圖說明

圖1為一實施方式的AG22多肽的完全抗原的制備方法的流程圖；

圖2為交聯劑活化的匙孔血藍蛋白的結構示意圖；

圖3為半胱氨酸鹽酸鹽一水物的結構示意圖；

圖4為5,5'-二硫雙(2-硝基苯甲酸)的結構示意圖；

圖5為ELISA法測定AG22多肽的完全抗原的多克隆抗體的效價得到的結果圖。

具體實施方式

為使本發明的上述目的、特征和優點能夠更加明顯易懂，下面結合附圖對本發明的具體實施方式做詳細的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細節以便于充分理解本發明。但是本發明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本發明內涵的情況下做類似改進，因此本發明不受下面公開的具體實施的限制。