[發(fā)明專利]一種耐鹽脫氮復(fù)合菌劑及其制備和使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310510802.2
• 申請(qǐng)日: 2013-10-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103589669A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐婧;陳金楠;傅金祥;肖亞男
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 沈陽(yáng)建筑大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C02F3/34;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽(yáng)東大專利代理有限公司 21109
• 代理人: 梁焱

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及一種耐鹽脫氮復(fù)合菌劑及其制備和使用方法。

背景技術(shù)

高鹽廢水中除含有大量的有機(jī)污染物外，還具有大量的氯離子，這對(duì)高鹽廢水的傳統(tǒng)生化處理產(chǎn)生了負(fù)面的影響。無(wú)機(jī)鹽類在微生物生長(zhǎng)過(guò)程中起著促進(jìn)酶反應(yīng)、維持膜平衡和調(diào)節(jié)滲透壓的重要作用。但氯離子濃度過(guò)高，會(huì)對(duì)微生物的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制，其主要原因在于：

（1）鹽濃度過(guò)高時(shí)滲透壓高，使微生物細(xì)胞脫水，引起細(xì)胞原生質(zhì)分離；

（2）在含鹽濃度高的情況下，鹽析作用會(huì)使脫氫酶活性降低；

（3）高氯離子濃度對(duì)細(xì)菌有毒害作用；

（4）由于水的密度增加，活性污泥容易上浮流失。

一般來(lái)說(shuō)海水的鹽度在3%左右，工業(yè)上把鹽度和海水相當(dāng)甚至超過(guò)海水的廢水成為高鹽廢水。目前對(duì)高鹽廢水的處理可分為物理化學(xué)法和生物法兩大類，由于此類廢水的溶解性有機(jī)物含量高，一般物理、化學(xué)方法難以處理并且處理成本高，而生物處理法具有經(jīng)濟(jì)、高效、無(wú)害的特點(diǎn)，仍然是首選的處理方法。但當(dāng)廢水中含有暫時(shí)性有毒物質(zhì)，對(duì)微生物有毒害作用，用一般生物方法治理，降解速率較慢，菌種需要較長(zhǎng)的一段時(shí)間來(lái)適應(yīng)，而通過(guò)投加優(yōu)勢(shì)菌株可迅速有效降解目標(biāo)污染物。由于生物處理系統(tǒng)是一個(gè)十分復(fù)雜的系統(tǒng)，投加單一菌株無(wú)法達(dá)到最佳處理狀態(tài)。因此需要一種既可以脫氮又耐鹽的復(fù)合菌劑來(lái)提高高鹽廢水的脫氮效率。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種耐鹽脫氮復(fù)合菌劑及其制備和使用方法，目的是通過(guò)四種微生物相互作用、相互影響，明顯提高高鹽廢水的脫氮效果。

一種耐鹽脫氮復(fù)合菌劑，由具有反硝化特性且脫氮過(guò)程中有亞硝氮積累的鹽單胞菌(Halomonas?sp.)、具有反硝化特性且脫氮過(guò)程中無(wú)亞硝氮積累的鹽單胞菌(Halomonas?sp.)、具有硝化特性的芽胞桿菌(Bacillus?sp.)和具有耐鹽特性的鹽單胞菌(Halomonas?sp.)按照體積比1:1:（10~20）:（60~85）混合。

其中，所述的具有耐鹽特性的鹽單胞菌的菌落顏色為乳白色，菌株個(gè)體呈圓形，無(wú)芽孢，革蘭氏染色為陰性，邊緣整齊光滑，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陽(yáng)性，能利用多種碳源。

所述的具有硝化特性的芽胞桿菌的菌落顏色為乳白色，菌株個(gè)體呈桿狀，革蘭氏染色為陽(yáng)性，接觸酶陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性。

所述的具有反硝化特性且脫氮過(guò)程中有亞硝氮積累的鹽單胞菌的菌落顏色為乳白色，菌株個(gè)體呈圓形，無(wú)芽孢，革蘭氏染色為陰性，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陽(yáng)性，能利用多種碳源。

所述的具有反硝化特性且脫氮過(guò)程中無(wú)亞硝氮積累的鹽單胞菌菌落顏色為乳白色，菌株個(gè)體呈圓形，無(wú)芽孢，革蘭氏染色為陰性，邊緣整齊光滑，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陽(yáng)性，能利用多種碳源。

上述耐鹽脫氮復(fù)合菌劑的制備方法按照以下步驟進(jìn)行：

（1）將具有耐鹽特性的鹽單胞菌、具有硝化特性的芽胞桿菌、具有反硝化特性且脫氮過(guò)程中有亞硝氮積累的鹽單胞菌和具有反硝化特性且脫氮過(guò)程中無(wú)亞硝氮積累的鹽單胞菌分別接種于固體培養(yǎng)基上進(jìn)行活化；

（2）用接菌環(huán)取上述活化的四種菌落分別接種于相應(yīng)的液體培養(yǎng)液中，在30℃、125r/min條件下進(jìn)行恒溫振蕩，并在好氧條件下培養(yǎng)1~2天，獲得四種液體菌劑種子液；

（3）將上述種子液擴(kuò)大培養(yǎng)后，將擴(kuò)大培養(yǎng)的具有反硝化特性且脫氮過(guò)程中有亞硝氮積累的鹽單胞菌、具有反硝化特性且脫氮過(guò)程中無(wú)亞硝氮積累的鹽單胞菌、具有硝化特性的芽胞桿菌和具有耐鹽特性的鹽單胞菌按照體積比1:1:（10~20）:（60~85）混合，即為得到耐鹽脫氮復(fù)合菌劑；

或者將步驟（2）中得到的四種液體菌劑種子液按照體積比1:1:（10~20）:（60~85）體積比混合，再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

所述的具有耐鹽特性的鹽單胞菌的液體培養(yǎng)液配方為：牛肉膏：10g/L，蛋白胨：10g/L，NaCl：26.726g/L，MgSO₄：3.248g/L，MgCl₂：2.26g/L，CaCl₂：11.53g/L，NaHCO₃：0.198g/L，KCl：0.721g/L；步驟（1）中所述的活化用固體培養(yǎng)基是在上述成分中加入占總重量加2%的瓊脂粉。