[發明專利]乳酸糞鏈球菌的發酵方法

有效

• 申請號: 201310510336.8
• 申請日: 2013-10-26
• 公開（公告）號: CN103540550A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 蘭亞朝;韓曉平
• 申請（專利權）人: 蘭亞朝
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/46
• 代理公司: 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源

1.一種乳酸糞鏈球菌的發酵方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）一、二、三級培養基的配制：按質量比為100:6:12:20:20:20分別稱取牛心浸液、氯化鈉、蛋白胨、豬肝浸液、羊肝浸液和葡萄糖，將牛心浸液、氯化鈉、蛋白胨、豬肝浸液和羊肝浸液混合得到混合液A，向混合液A中添加碳酸鈉調節混合液A的pH至7.2-7.4，然后將混合液A煮沸過濾后得到濾液A，將葡萄糖添加到濾液A中攪拌均勻得到混合液B，分別取15ml混合液B作為一級培養基、取150ml混合液B作為二級培養基、取800ml混合液B作為三級培養基，其中，一級培養基中添加有質量為15ml混合液B質量1.5-2%的瓊脂，一、二、三級培養基經115℃蒸汽滅菌25min后，再空白培養24h，最后置于冰箱保存備用，冰箱溫度控制在4-8℃；

2）一、二、三級種子培養：取乳酸糞鏈球菌作為菌種接入空白斜面試管內并在37-39℃下培養18-20h得到斜面菌種，其中，所取的乳酸糞鏈球菌的質量與步驟1）中牛心浸液的質量比為0.5:100；將得到的斜面菌種接入一級培養基中并在37-39℃下培養18-20h得到一級種子，將一級種子接入二級培養基中并在37-39℃下培養18-20h得到二級種子，將二級種子接入三級培養基中并在37-39℃下培養18-20h得到三級種子；

3）發酵罐培養液的配制：按質量比為9:9:72:20:20:18:72：400:1400分別稱取牛肉膏、氯化鈉、蛋白胨、豬肝浸液、羊肝浸液、碳酸鈣、葡萄糖、純化水A和純化水B；將稱量好的純化水A、牛肉膏、氯化鈉和蛋白胨加入夾層鍋內，打開夾層鍋的蒸汽閥，加熱攪拌使其充分溶解，加熱溫度為80-85℃，再將稱量好的豬肝浸液和羊肝浸液加入到夾層鍋內，攪拌均勻得到混合液C，通過向混合液C中添加碳酸鈉調節混合液C的pH至7.2-7.4，最后過濾混合液C得到濾液B；將濾液B以及稱量好的純化水B、碳酸鈣、葡萄糖加入發酵罐中攪拌均勻得到培養液A，對培養液A進行121℃蒸汽滅菌25min后，放冷至37-40℃；

4）發酵罐內培養液的發酵：將步驟2）中得到的三級種子加入到發酵罐內的培養液A中，三級種子與培養液A的質量比為1:580，然后在39-41℃培養16-18h，培養過程中每隔1h開動發酵罐攪拌一次，每次攪拌10min，等發酵罐內的碳酸鈣完全消失時，發酵完成即可放罐。

2.根據權利要求1所述的一種乳酸糞鏈球菌的發酵方法，其特征在于：所述的牛心浸液制備方法如下：取新鮮的牛心，除去脂肪、筋膜及血管，切細絞碎得到牛心肉末，取牛心肉末并加純化水，純化水的添加量為每3g牛心肉末添加10ml純化水，將添加純化水的牛心肉末置于冰箱中浸漬18h以上，冰箱溫度控制在4-8℃，然后取出水浴加熱至肌肉凝結成餅狀并浮于液面，水浴加熱溫度控制在98-100℃，浸液呈澄明淡黃色，放冷至室溫，過濾得到的濾液即為所述的牛心浸液；豬肝浸液、羊肝浸液的制備方法與牛心浸液的制備方法相同。

3.根據權利要求1或2所述的一種乳酸糞鏈球菌的發酵方法，其特征在于：在步驟2）中，作為菌種的乳酸糞鏈球菌是從直接購買或實驗室保存的乳酸糞鏈球菌斜面挑去少許菌落劃線于培養基平皿上培養，反復多次，最后選取平皿上的大菌落，轉接到試管斜面內并在37-39℃下培養18-20h得到斜面菌種。