[發明專利]三氧化二砷隱形免疫靶向抗腫瘤制劑的制備方法

有效

• 申請號: 201310507359.3
• 申請日: 2013-10-25
• 公開（公告）號: CN103520728A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 宋曉麗;尤娟;王娟;朱愛萍;郭榮
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A61K47/34
• 分類號: A61K47/34;A61K47/12;A61K33/36;A61K9/16;A61P35/00
• 代理公司: 揚州市錦江專利事務所 32106
• 代理人: 江平

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，尤其涉及一種包封抗癌藥物As₂O₃的制備方法。

背景技術

三氧化二砷（As₂O₃）是傳統中藥砒霜中的主要活性成分，研究發現As₂O₃對急性早幼粒細胞白血病（APL）具有顯著的療效，可誘導APL細胞凋亡。最近的研究表明As₂O₃對惡性實體瘤也具有強大的抗腫瘤作用，尤其是As₂O₃抗肝癌的作用受到國內外腫瘤界的廣泛關注。但是使用As₂O₃作為抗肝癌藥物，仍然存在著一定的問題：（1）血漿中砷的半衰期很短，給藥后短時間內就會被迅速清除；（2）藥物本身具有毒性，這也就限定了其直接使用時劑量必須要低，相應的抗癌效果也隨之降低。

針對上述問題，國內外的研究者提出了將砷化物制成緩釋制劑，以延長其在體內的半衰期，其中以脂質體的研究最為廣泛。然而脂質體不穩定，包封藥物后容易泄露，帶來一定的毒副作用。另外傳統的緩釋制劑無靶向性，給藥后分布于全身各個器官，很大程度上削弱了藥物的抗癌效果；同時藥劑在進入人體后，難以逃避人體免疫系統中巨噬細胞對其的吞噬作用，使得最終達到病變部位發揮藥效的藥劑大打折扣。因此，提出一種可以高效、穩定地包封As₂O₃的隱形免疫靶向抗腫瘤制劑，提高其抗癌效果，具有十分重大的意義。

發明內容

本發明的目的在于克服抗癌藥物As₂O₃在使用過程中存在的不足，從而提出一種新穎、高效、隱形、靶向的As₂O₃抗腫瘤制劑的制備方法。

本發明的步驟如下：

????1）將As₂O₃溶于氫氧化鈉水溶液中，配成含As₂O₃濃度為10~100mg/mL的砷溶液，作為水相；

????2）將乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）溶于三氯甲烷中，作為油相；

????3）將水相在磁力攪拌下加入到油相中，然后冰浴乳化超聲，形成W/O初乳；

????4）將W/O初乳與第一份泊洛沙姆的水溶液混合，冰浴乳化超聲形成W/O/W復乳；

????5）將W/O/W復乳與第二份泊洛沙姆水溶液均勻混合后，蒸發除去有機溶劑，離心收集沉淀、去離子水洗滌，冷凍干燥得載三氧化二砷納米粒。?

6）將上述載三氧化二砷納米粒分散于水中，加入N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）活化后，與雙端氨基聚乙二醇（NH₂-PEG-NH₂）、乳糖酸（LA）和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）在室溫下磁力攪拌反應，離心收集沉淀，即得三氧化二砷隱形免疫靶向抗腫瘤制劑。

本發明采用一種可生物降解、生物相容性良好的乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）作為包封材料，采用雙乳化-溶劑揮發法制得載三氧化二砷納米粒。通過化學鍵共價偶聯的方法在載三氧化二砷納米粒表面修飾兩親性聚乙二醇（PEG），賦予其“隱形”功能，通過表面同步修飾LA，賦予其免疫靶向性。最終獲得的三氧化二砷隱形免疫靶向抗腫瘤制劑微粒尺寸均一，形貌可控，分散性好，包封率可達90%以上。在體外可穩定釋放45天，具備緩釋功能，是一種新穎、高效的隱形免疫靶向As₂O₃制劑，可望應用于肝癌的治療。

另，步驟1）中，所述氫氧化鈉水溶液的質量百分比為4%，以增大As₂O₃的溶解度。

步驟2）中，所述乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）的濃度為30～50mg/mL，以提高As₂O₃包封率。

步驟3）中，所述水相和油相的混合體積比為1：10，超聲功率為180W，超聲時間為60s，以形成均勻的W/O初乳液。

步驟4）中，第一份泊洛沙姆水溶液的質量百分比濃度為3%，超聲功率為360W，超聲時間為90s，以形成分散均勻的W/O/W復乳液。

步驟5）中，第二份泊洛沙姆水溶液的質量百分比濃度為0.3%，將W/O/W復乳與第二份泊洛沙姆水溶液混合時以機械攪拌，速度為1200rpm，以進一步分散穩定W/O/W復乳。