[發明專利]檢測花生過敏原用擴增內標、其構建方法及其應用

無效

• 申請號: 201310505536.4
• 申請日: 2013-10-24
• 公開（公告）號: CN103589790A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 蔡琴;陳沁;張文舉;關瀟;鄧志瑞
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 陸聰明

1.一種檢測花生過敏原用擴增內標，其特征在于該擴增內標基因的序列為SEQ?ID?NO.1所示的堿基序列。

2.一種構建根據權利要求1所述的檢測花生過敏原用擴增內標的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：

a.?通過BLAST比對，選擇與花生過敏原Ara?h?1基因同源性較低的單增李斯特菌FSL?R2-561基因（NC_017546）作為內參基因，根據內參基因的序列設計引物，選擇擴增產物比目的片段大150bp?~?250bp的引物FSL-F/R；所述的花生過敏原Ara?h?1的基因為：

Ara?h?1-F：CTGGAAACCTTGAACTCGT，

Ara?h?1-R：GTTGATGGCTACTGGATGA；

所述的內參基因FSL?R2-561的引物序列為：

FSL-F：?TAGCCAACCGATGTTTCTGTATC，

FSL-R：?CATCATTTAGCGTGACTTTCTTTCA；

b.?選取步驟a所得的內參基因的引物FSL-F/R的5’末端的8個堿基與花生過敏原引物Ara?h?1-F/R的3’末端相連，得到27bp的長引物IAC-F/R，該長引物的序列為：

IAC-F：CTGGAAACCTTGAACTCGTTAGCCAAC，

IAC-R：GTTGATGGCTACTGGATGACATCATTT；

c.?以步驟a所得內參基因FSL?R2-561基因為模板，以步驟a所得FSL-F/R為引物，進行PCR擴增，得到351bp的PCR產物；以該PCR產物為模板，步驟b所得長引物IAC-F/R為引物，進行PCR擴增，得到389bp的PCR產物即IAC片段；

d.?將步驟c所得IAC片段進行PCR擴增，將擴增產物進行割膠回收，連接到載體pMD18-T?Simple?Vector，轉化大腸桿菌感受態細胞DH5α，提取質粒，即得到檢測花生過敏原用擴增內標。

3.一種根據權利要求1所述的檢測花生過敏原用擴增內標在檢測花生過敏原中的應用。