[發明專利]一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法

有效

• 申請號: 201310504715.6
• 申請日: 2013-10-23
• 公開（公告）號: CN103548563A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 肖永東
• 申請（專利權）人: 關嶺百龍匯生物科技有限公司
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 谷慶紅

1.一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：該方法包括制備母鐘、搖瓶靜置培養、搖瓶震蕩培養、碎化處理和接種六步驟即可得到栽培用種。?

2.根據權利要求1所述的一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：包括以下步驟：?

1）制備母種：將菌種塊接種到試管PDA培養基中，置于20-30℃環境中避光培養6-16天；?

2）搖瓶靜置培養：將步驟1）中培養的母種切成3～5mm的小塊，用接種刀挑起菌絲體部，接種到搖瓶中，并使其懸浮在液面上，每瓶接入量為5—10塊，將接好種的搖瓶靜置在放在20～30℃的恒溫箱中培養4-14天；?

3）搖瓶震蕩培養：將步驟2）中搖瓶靜置培養放在頻率為200r/min、溫度20～30℃的震蕩搖床上培養，使菌種在搖瓶中震蕩培養2～12天，得到直徑為2cm左右的菌絲球；?

4）碎化處理：將步驟3）中培養好的搖瓶轉移到頻率為500r/min的電磁攪拌器上作5～15個周期攪拌，得到40～60%的碎化菌絲體；?

5）接種：將碎化菌絲體接入固體栽培袋，在20～30℃黑暗條件下培養30～35天可得到栽培用種。?

3.根據權利要求1、2任意一項所述的一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：包括以下步驟：?

1）制備母種：將菌種塊接種到試管PDA培養基中，置于24-27℃環境中避光培養8-12天；?

2）搖瓶靜置培養：將步驟1）中培養的母種切成3～5mm的小塊，用接種刀挑起菌絲體部，接種到搖瓶中，并使其懸浮在液面上，每瓶接入量為5～10塊，將接好種的搖瓶靜置在放在22～27℃的恒溫箱中培養6-10天；?

3）搖瓶震蕩培養：將步驟2）中搖瓶靜置培養放在頻率為200r/min、溫度23～27℃的震蕩搖床上培養，使菌種在搖瓶中震蕩培養6～10天，得到直徑為2cm左右的菌絲球；?

4）碎化處理：將步驟3）中培養好的搖瓶轉移到頻率為500r/min?的電磁攪拌器上作5～10個周期攪拌，得到40～60%的碎化菌絲體；?

5）接種：將碎化菌絲體接入固體栽培袋，在20～26℃黑暗條件下培養30～35天可得到栽培用種。?

4.根據以上任意一項權利要求所述的一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：包括以下步驟：?

1）制備母種：將菌種塊接種到試管PDA培養基中，置于25℃環境中避光培養11天；?

2）搖瓶靜置培養：將步驟1）中培養的母種切成3～5mm的小塊，用接種刀挑起菌絲體部，接種到搖瓶中，并使其懸浮在液面上，每瓶接入量為5～10塊，將接好種的搖瓶靜置在放在27℃的恒溫箱中培養11天；?

3）搖瓶震蕩培養：將步驟2）中搖瓶靜置培養放在頻率為200r/min、溫度26℃的震蕩搖床上培養，使菌種在搖瓶中震蕩培養8天，得到直徑為2cm左右的菌絲球；?

4）碎化處理：將步驟3）中培養好的搖瓶轉移到頻率為500r/min的電磁攪拌器上作8個周期攪拌，得到40～60%的碎化菌絲體；?

5）接種：將碎化菌絲體接入固體栽培袋，在26℃黑暗條件下培養34天可得到栽培用種。?

5.根據權利要求2、3或4任意一項所述的一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：所述的PDA培養基包含馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、瓊脂和水。?

6.根據權利要求5所述的所述的一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：所述的PDA培養基包含馬鈴薯200份、葡萄糖30份、蛋白胨15份、瓊脂40和水1000份。?

7.根據權利要求5或6所述的所述的一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：所述的所述的PDA培養基在1.3～1.7kPa下進行密閉滅菌30min。?

8.根據權利要求5或6所述的所述的一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：所述的PDA培養基的pH值設置在5.6～5.9。?

9.根據權利要求2、3或4任意一項所述的所述的一種萌發菌液?體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：所述的搖瓶培養液由蛋白胨0.2%，葡萄糖0.1%，磷酸二氫鉀0.01%，硫酸鎂0.01%，牛肉膏0.01%，維生素B1、B2各0.1克，加20%馬鈴薯汁組成。?

10.根據權利要求9所述的所述的一種萌發菌液體菌種菌絲球碎化處理方法，其特征在于：所述的搖瓶培養液的pH值設置在5.6～5.9。?