[發明專利]一種結球甘藍胚狀體再生植株誘導方法

有效

• 申請號: 201310499748.6
• 申請日: 2013-10-23
• 公開（公告）號: CN103609437A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 張亞麗
• 申請（專利權）人: 張亞麗
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙) 11316
• 代理人: 滑春生;趙永偉

技術領域

?本發明涉及一種結球甘藍胚狀體再生植株的培養方法，屬于植物組織培養領域。

背景技術

結球甘藍（Brassica?oleracea?L.var.capitata?L.）是十字花科、蕓薹屬的植物，為甘藍（Brassica?oleracea?L.）的變種，又名卷白菜、洋白菜和圓白菜等。甘藍具有耐寒、抗病、適應性強、易貯存、產量高、品質好，是我國北方的主要蔬菜之一。

傳統的育種方法是用優良品種進行自交分離，此種育種方法周期長、獲得優質品種的概率較低。自1982年Lichter首次報道油菜游離小孢子培養獲得再生植株以來，蕓薹屬作物在出胚率、出胚量、胚培養及再生植株方面都獲得了很大的成功。小孢子育種方法可以在1-2年內快速的獲得植株，與傳統育種方法相比，育種時間大大縮減，提高了育種的進程和育種效率。然而，以小孢子為外植體直接誘導再生植株或誘導胚狀體或誘導出芽，誘導率不高，如中國專利ZL201010018236.X一種結球甘藍游離小孢子培養獲得再生植株的方法，最佳組合的出胚率為10.9胚/花蕾，小孢子的誘導率低。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種結球甘藍再生植株的誘導方法，以結球甘藍無菌苗的胚軸為外植體，通過誘導胚狀體的發生，進而誘導再生植株的發生，胚狀體的誘導率和再生植株的發生率極高。

本發明采用的技術方案是：

1、無菌苗誘導：挑選結實飽滿的結球甘藍種子，消毒后清洗干凈，接種于無菌苗誘導培養基中，在無菌培養室中進行培養：培養條件為溫度18-22℃，光照1500-2000Lx，空氣濕度50%-60%，無菌苗培養至5-8cm時，將無菌苗從培養室中取出，冷卻的高壓滅菌水清洗干凈；

2、胚狀體的誘導：在無菌操作臺中，選取結球甘藍無菌苗的下胚軸作為外植體，將下胚軸切成3-4mm的小段，接種于胚狀體誘導培養基中，于無菌環境中在18-22℃、1000-2000?Lx、空氣濕度65%-70%條件下誘導胚狀體發生；

3、再生植株誘導：外植體形成胚狀體后，于無菌條件下，將長有胚狀體的外植體用冷卻的無菌水清洗干凈后轉移到再生植株誘導培養基中，于22-25℃，3000-4000?Lx、空氣濕度65%-70%條件下誘導再生植株發生；

4、煉苗、移植：將裝有再生植株的培養瓶轉移到室溫大棚中，打開瓶塞培養5-7d，將再生植株從培養瓶中取出、洗凈根部瓊脂，將再生植株移入蛭石煉苗培養基中培養7-10d后移入大棚土壤中培養。

優選的，所述的的甘藍種子消毒過程為：種子用自來水清洗干凈后，先于70-75%的乙醇中消毒15s，在于體積濃度為3%的次氯酸鈉溶液中消毒10min，最后用高壓滅菌冷卻后的自來水清洗種子。

優選的，所述的無菌苗誘導培養基配方為：每1L?B5培養基中添加20-40?g/L?蔗糖、5-8g/L瓊脂，高溫高壓滅菌后冷卻至室溫待用。

所述的胚狀體誘導培養基配方為：每1L?MS培養基中添加?1-2mg/L?吲哚乙酸、?0.1-1?mg/L?6-糖基氨基嘌呤、20-40g/L?蔗糖、5-8g/L瓊脂，高溫高壓滅菌后冷卻至室溫待用。

所述的再生植株培養基配方為：每1L?MS培養基中添加?1-2mg/L?萘乙酸、?0.1-1?mg/L?6-糖基氨基嘌呤、20-40g/L?蔗糖、5-8g/L瓊脂，高溫高壓滅菌后冷卻至室溫待用。

本發明所述的結球甘藍胚狀體再生植株的培養方法，以下胚軸作為誘導胚狀體的外植體，誘導率可達90%，胚狀體誘導再生植株的誘導率可以達到90%；通過胚狀體誘導再生植株，形成的再生植株遺傳穩定性高，與母體沒有生理隔離現象發生，增值系數高。

具體實施方式

下面結合具體的實施方式對本發明做進一步詳細的說明。

實施例1：

1、無菌苗誘導：挑選結實飽滿的結球甘藍種子，種子用自來水清洗干凈后，先于70-75%的乙醇中消毒15s，在于體積濃度為3%的次氯酸鈉溶液中消毒10min，最后用高壓滅菌冷卻后的自來水清洗種子；將消毒后的種子接種于無菌苗誘導培養基中，在無菌培養室中進行培養：培養條件為溫度18-22℃，光照1500-2000Lx，空氣濕度50%-60%，無菌苗培養至5-8cm時，將無菌苗從培養室中取出，冷卻的高壓滅菌水清洗干凈；