[發明專利]一種結球甘藍胚狀體再生植株誘導方法

有效

• 申請號: 201310499748.6
• 申請日: 2013-10-23
• 公開（公告）號: CN103609437A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 張亞麗
• 申請（專利權）人: 張亞麗
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙) 11316
• 代理人: 滑春生;趙永偉

1.一種結球甘藍胚狀體再生植株的培養方法，其特征在于，步驟如下：

（1）無菌苗誘導：結球甘藍種子消毒后清洗干凈，接種于無菌苗誘導培養基中，在無菌培養室中進行培養：溫度18-22℃，光照1500-2000Lx，空氣濕度50%-60%，無菌苗培養至5-8cm時，將無菌苗從培養室中取出，冷卻的高壓滅菌水清洗干凈；

（2）胚狀體的誘導：在無菌操作臺中，以無菌苗的下胚軸作為外植體，將下胚軸切成3-4mm的小段，接種于胚狀體誘導培養基中，于無菌環境中在18-22℃、1000-2000?Lx、空氣濕度65%-70%條件下誘導胚狀體發生；

（3）再生植株誘導：外植體形成胚狀體后，于無菌條件下，將長有胚狀體的外植體用冷卻的無菌水清洗干凈后轉移到再生植株誘導培養基中，于22-25℃，3000-4000?Lx、空氣濕度65%-70%條件下誘導再生植株發生；

（4）煉苗、移植：將裝有再生植株的培養瓶轉移到室溫大棚中，打開瓶塞培養5-7d，將再生植株從培養瓶中取出、洗凈根部瓊脂，將再生植株移入蛭石煉苗培養基中培養7-10d后移入大棚土壤中培養。

2.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述的的甘藍種子消毒過程為：種子用自來水清洗干凈后，先于70-75%的乙醇中消毒15s，在于體積濃度為3%的次氯酸鈉溶液中消毒10min，最后用高壓滅菌冷卻后的自來水清洗種子。

3.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述的無菌苗誘導培養基配方為：每1L?B5培養基中添加20-40?g/L?蔗糖、5-8g/L瓊脂，高溫高壓滅菌后冷卻至室溫待用。

4.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述的胚狀體誘導培養基配方為：每1L?MS培養基中添加?1-2mg/L?吲哚乙酸、?0.1-1?mg/L?6-糖基氨基嘌呤、20-40g/L?蔗糖、5-8g/L瓊脂，高溫高壓滅菌后冷卻至室溫待用。

5.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述的再生植株培養基配方為：每1L?MS培養基中添加?1-2mg/L?萘乙酸、?0.1-1?mg/L?6-糖基氨基嘌呤、20-40g/L?蔗糖、5-8g/L瓊脂，高溫高壓滅菌后冷卻至室溫待用。