[發明專利]草酸青霉BAM-1及其分離純化方法與應用

有效

• 申請號: 201310497471.3
• 申請日: 2013-10-22
• 公開（公告）號: CN103525710A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 郭子武;陳雙林;李迎春;楊清平
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院亞熱帶林業研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C09K17/00;C12R1/80;C09K101/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種草酸青霉BAM-1及其分離純化方法與應用。

背景技術

雷竹是我國優良的筍用竹種，筍味鮮美、產量高、效益好，在我國南方的浙江、江西等地有規模栽培，目前我國雷竹林面積達20多萬hm^-2。以雷竹為主栽竹種的竹筍業已成為區域農村經濟社會發展的支柱產業和農民家庭經濟收入的主要來源。自上世紀90年代初以來，許多筍用竹產區大面積推廣應用有機材料（主要為礱糠、稻草）林地覆蓋技術，利用覆蓋物的發酵增溫、保溫、保濕作用促使筍芽提早分化、萌發，在秋冬季、早春有竹筍產出，滿足市場對鮮筍供應淡季的大量需求，顯著地提高了筍用竹林的經濟效益，這對雷竹在許多適生區的大規模推廣栽培起到了極大的促進作用。然而，林地有機材料覆蓋過程中大量有機覆蓋物(39?t·hm^-2·a^-1稻草和54?t·hm^-2·a^-1礱糠)的輸入對雷竹林生態系統健康產生了嚴重的影響，突出表現在覆蓋竹林極易產生立地生產力衰退，僅浙江省臨安市3萬hm²的雷竹林中就有1/2以上竹林出現了不同程度的退化，重度退化竹林幾乎無經濟產出。究其原由，短期內難以自然分解的有機材料覆蓋物的大量林地存留是引起竹林退化的主要原因之一。有機覆蓋物均為高C/N比材料，特別是礱糠，自然條件下分解需3年以上時間，覆蓋后林地很難清理徹底，多年覆蓋的竹林地存留覆蓋物厚度至少5cm以上，每年竹林出筍成竹后的林地墾復使大量有機覆蓋物充斥于土壤中，導致土壤發生物理、化學和生物性劣變。目前針對雷竹林覆蓋過程中存留的大量的有機覆蓋物尚無生態、環保的處理方法，竹農也多采取深翻林地和加客土的方式來減輕有機覆蓋物存留所帶來的負面影響，但仍無法很好地解決有機覆蓋物短期內難以有效分解的現實問題。因此，分離與篩選高C/N比有機覆蓋材料高效分解微生物，并掌握其培養條件、產酶特性、發酵方法及覆蓋雷竹林中的應用技術，有利于雷竹林土壤環境改善，促進退化雷竹林恢復，保障雷竹林健康可持續經營和竹筍質量安全，也是竹農生產中迫切需要的實用技術，推廣應用前景巨大。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明的目的在于提供一種能高效分解有機覆蓋物的菌種，尤其是對竹林地存留的有機覆蓋物具有高效分解能力的微生物菌株，并提供該菌株的篩選、分離純化、培養等方法，以及該菌株在分解林地有機覆蓋物上的應用技術，從而解決竹林地有機覆蓋物大量存留引起竹林退化的現實問題。

本發明的技術方案如下：

本發明提供的具有高效分解有機覆蓋物能力的微生物菌株為草酸青霉（Penicillium?oxalicum）BAM-1，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日：2013年10月10日，保藏號為CGMCC?No.8315。

草酸青霉（Penicillium?oxalicum）BAM-1的特征為：菌落形態平坦，質地絨狀，菌絲體白色，分生孢子灰綠色，無可溶性色素。顯微鏡下觀察菌株的菌絲體，分生孢子梗發生于基質，壁平滑，帚狀枝雙輪生，偶有三輪生或單輪生；梗基每輪2-3個，13-20×3.2-3.7μm，彼此通常較緊貼；瓶梗幼齡時為瓶狀至披針狀，充分成熟時近圓柱形，梗頸明顯，分生孢子橢圓形，4.5-5.5×3.0-4.0μm，壁平滑。該菌株26S?rRNA基因序列遞交到GenBank數據庫，序列與草酸青霉(Penicillium?oxalicum)?26S?rRNA基因序列高度同源(99.3%)。

所述的草酸青霉（Penicillium?oxalicum）BAM-1，其分離純化方法包括以下步驟：

1）富集培養：取土壤和腐爛有機覆蓋物樣品，在無菌水中振蕩分散后，取懸濁液接種于馬丁氏孟加拉紅富集培養基中，28?℃下120?r·min^-1振蕩培養2?d，反復培養3次；馬丁氏孟加拉紅富集培養基的配方為：KH₂PO₄?1?g、MgSO₄·7H₂O?0.5?g、蛋白胨5?g、葡萄糖10?g、瓊脂20?g、孟加拉紅3.3?mg、鏈霉素30?μg、H₂O?1000?ml、自然pH值；