[發明專利]一種單酶催化植物油制備天然香料的方法

有效

• 申請號: 201310497257.8
• 申請日: 2013-10-21
• 公開（公告）號: CN104560390B
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發明（設計）人: 朱竹君;陳海敏;嚴小軍;駱其君;楊銳;陳娟娟
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12P1/00
• 分類號: C12P1/00;C11B9/00
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司33102
• 代理人: 袁忠衛

1.一種單酶催化植物油制備天然香料的方法，其特征在于包括以下步驟：

a）、先將植物油進行水解，得到濃度為50~500 mg/mL的植物油水解產物；

b）、取上述2.5~25uL植物油水解產物加入到0.25~2.5mL濃度為20~30mg/L的雙功能酶蛋白溶液中，混勻后在18~22℃下震蕩反應0.5~2.5h；

c）、在上述反應液中加入0.25~2.5mL乙醚，4~10℃避光震搖萃取50~70min，收集上層有機相；并在下層相中再加入乙醚重復抽提1~3次，然后合并上層有機相，并加入1~5g無水硫酸鎂充分干燥；

d）、將得到的有機溶劑相進行10~20℃低溫下旋轉蒸發濃縮獲得天然香料；

所述步驟b）中的雙功能酶蛋白溶液為一種具有氫過氧化物裂解功能的脂氧合酶PhLOX；

所述脂氧合酶PhLOX的cDNA，它的核苷酸序列如SEQID NO.1所述；它的氨基酸序列如SEQID NO.2所述。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟a) 的植物油水解的具體過程為：取100~500mg植物油，加2~5mL含5~7%（wt）KOH的甲醇水溶液，充氮氣1~2min后55~65℃水浴1.5~2.5h；冷卻，加1:0.9~1.1（v/v）的HCl水溶液調節pH至小于1；再加2~5mL 1:3~5（v/v）的氯仿/正己烷混合液抽提，3~5℃，9000~11000rpm離心4~6min，取上層有機相，余下混合液再重復抽提1~3次，合并有機相，氮氣吹干后用1mL色譜甲醇定容。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述甲醇水溶液中甲醇與水的體積比為3~5：1。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟c）的乙醚萃取的具體過程為：在酶反應液中加1:0.9~1.1（v/v）的乙醚震蕩混勻，3~5℃，9000~11000rpm離心4~6min，取上層有機相，余下混合液再重復萃取1~3次，合并有機相，加1~5g無水硫酸鎂充分干燥。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟d) 獲得的天然香料為C5、C6、C7、C8、C9-烯醛類化合物。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述植物油為葵花籽、玉米油、芝麻油或者大豆油。