[發明專利]一種用于核酸單分子檢測的樣本小皿及其制備方法

無效

• 申請號: 201310495121.3
• 申請日: 2013-10-18
• 公開（公告）號: CN103555568A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 劉斐;趙琳;單衍可;徐明飛
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種樣本小皿，特別是涉及一種用于核酸單分子檢測的樣本小皿。

背景技術

基因芯片Microarray技術將大量探針分子固定于支持物上后與標記的樣品分子進行雜交，通過檢測每個探針分子的雜交信號強度進而獲取樣品分子的數量和序列信息。通俗地說，就是通過微加工技術，將數以萬計、乃至百萬計的特定序列的DNA片段，有規律地排列固定于硅片、玻片等支持物上，構成的一個二維DNA探針陣列。但是傳統的基因芯片技術無法定量檢測，也無法觀察單個核酸分子的構象變化。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，克服現有技術的缺點，提供一種用于核酸單分子檢測的樣本小皿及其制備方法。該樣本小皿包括底板和玻璃蓋板，底板與蓋板之間連接并形成一個以上的腔室，每個腔室靠近底板的一面開有與外界連通的進口與出口。該樣本小皿的制備方法為：取實驗室常用的載玻片作為底板，在載玻片上鉆兩個小孔作為進口和出口，并清洗干凈，取兩段雙面膠粘貼于載玻片上，雙面膠間留有狹縫，進口和出口位于狹縫之間，再將實驗室常用的干凈的蓋玻片作為蓋板貼于雙面膠另一面，形成一個通道，用環氧基樹脂將通道的兩端封口，從而形成樣本小皿。

本發明進一步限定的技術方案是：

前述的用于核酸單分子檢測的樣本小皿，其腔室的形狀為長方形，進口與出口設置在長方形相互遠離的兩端。

前述的用于核酸單分子檢測的樣本小皿，其長方形腔室的寬為4至6毫米，長方形腔室的高為0.1至0.2毫米，長方形腔室的長為10至30毫米。

前述的用于核酸單分子檢測的樣本小皿，內腔的玻璃蓋板表面上非特異性吸附有生物素化的牛血清蛋白，生物素化的牛血清蛋白上特異性結合有親和素，親和素上特異性結合在生物素化的寡核苷酸的一端，生物素化的寡核苷酸的另一端上標記有Cy5熒光分子。

進一步的，前述的樣本小皿的制備方法，包括以下制備步驟：

步驟1：將溶解于緩沖液T50的生物素化的牛血清蛋白注入小皿的內腔中，靜置4至6分鐘；

步驟2：往內腔中注入緩沖液T50，將沒有非特異性吸附于內腔中的生物素化的牛血清蛋白洗脫；

步驟3：將溶于緩沖液T50的親和素注入內腔中，靜置1分鐘；

步驟4：往內腔中注入緩沖液T50，將沒有特異性結合于生物素化的牛血清蛋白上的親和素洗脫；

步驟5：注入一端標記有Cy5熒光分子的生物素化的的寡核苷酸到內腔中，使其與親和素特異性結合。

本發明的有益效果是：(1)本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿具備多個腔室，一個樣本小皿支持多組實驗；(2)本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿容易制備，利用實驗室環境資源即可制得；(3)本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿可以結合熒光倒置顯微鏡，實現對核酸分子的定量檢測。

附圖說明

圖1為本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿的宏觀結構爆炸圖

圖2為本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿的宏觀結裝配炸圖

圖3為本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿內腔玻璃表面微觀結構圖a

圖4為本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿內腔玻璃表面微觀結構圖b

圖5為本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿內腔玻璃表面微觀結構圖c

圖6為本發明的用于核酸單分子檢測的樣本小皿內腔玻璃表面微觀結構圖d

載玻片1，蓋玻片2，內腔3，進口4，出口5，小管6，雙面膠7，生物素化的牛血清蛋白8，親和素9，生物素化的寡核苷酸10，Cy5熒光分子11，寡核苷酸12，Cy3染料分子13，待測樣本核苷酸14

具體實施方式

實施例1

本實施例提供了一種在實驗室環境下易于制作的用于核酸單分子檢測的樣本小皿及其制備方法。結合圖1和圖2，首先在載玻片1上鉆兩個直徑在0.6至1毫米的孔，作為樣本小皿的進口4和出口5，溶液最終都是通過進口4和出口5流進和流出的。進口4和出口5是相對的，取決于從哪個孔注入液體。

接著對載玻片1和蓋玻片2進行清洗。一種優選的清洗方案為：先于10％的Alconox清洗劑中超聲清洗20min，再于水中超聲清洗5min，再于丙酮中超聲清洗15min，然后于1mol/L的KOH中超聲清洗20min，最后用去離子水漂洗載玻片1。清洗完畢后還可選擇性的使用丙烷噴槍燃燒成像面，目的是為了去除殘余的熒光有機分子。