[發(fā)明專利]一種血清β-羥丁酸試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310493809.8
• 申請日: 2013-10-21
• 公開（公告）號: CN103528977A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李濤;溫云飛;牛慶慧
• 申請（專利權(quán)）人: 青島貝美生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28
• 代理公司: 山東清泰律師事務所 37222
• 代理人: 聶磊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種血清β-羥丁酸的試劑盒及其檢測方法，具體的說是一種酶比色法檢測血清β-羥丁酸的方法。

背景技術(shù)

肝臟生成酮體，肝外組織能利用酮體作為能量來源，在正常情況下血中僅含少量酮體；但在某些情況下，如饑餓、糖尿病、高脂低糖膳食等由于脂肪動員增強，肝臟生成酮體量超過肝外組織利用酮體的能力，引起血中酮體的堆積，可導致酮癥酸中毒，特別在糖尿病病人中酮癥酸中毒非常常見。

對酮癥酸中毒的診斷與療效觀察常需測定血液中酮體的濃度，酮體是脂肪酸分解代謝的產(chǎn)物，包括三種成分：β-羥丁酸、乙酰乙酸和丙酮，其中β-羥丁酸是主要的成分，約占酮體總量的70％，因此一般以檢測血清β-羥丁酸的濃度反映體內(nèi)酮體的水平。

血清β-羥丁酸檢測方法有氣相色譜法、分光光度法和酶法，酶法測定血清β-羥丁酸因具有準確、簡便、快速、靈敏和特異的特點，受到臨床的重視。現(xiàn)有常用β-羥丁酸試劑盒所用的顯色劑均為INT，即：碘硝基氯化四氮唑藍；使用INT作為顯色劑存在抗干擾效果不好的特點，因此，如何改進現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，為廣大患者造福，是亟待解決的技術(shù)難題。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種血清β-羥丁酸試劑盒及其檢測方法，采用氯化硝基四氮唑蘭作為顯色劑，具有穩(wěn)定性好，線性高，抗干擾能力強和成本低的特點；同時檢測方法解決了基質(zhì)效應問題，有效提高了檢測的準確度。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是，提供一種血清β-羥丁酸試劑盒，它包括R1與R2試劑，所述R1試劑包含如下組分：

磷酸鉀緩沖液，???????????????100～150?mmol/L，PH7～8；

輔酶，???????????????????????2～5mmol/L；

黃遞酶，?????????????????????2～5KU/L；

氯化硝基四氮唑蘭，???????????0.5～1mmol/L；

BSA，???????????????????????0.5～1g/L；

海藻糖，?????????????????????2～5g/L；

所述R2試劑包含如下組分：

磷酸鉀緩沖液，???????????????100～150?mmol/L，PH7～8；

β-羥丁酸脫氫酶，????????????20～50KU/L；

BSA，???????????????????????2～5g/L。

上述的血清β-羥丁酸試劑盒的檢測方法，包括如下步驟：?

第一步，預備：

提供標準液、血清β-羥丁酸測定試劑盒R1與R2試劑以及待測標本；其中，標準液采用健康人血清為基質(zhì)；

第二步，初步混勻：

取6ul待測標本和R1試劑240～280ul混勻，置30-45℃孵育3～5分鐘；

第三步，二次混勻：

取R2試劑40～70ul與上述混合液混勻，孵育180～240秒后，空白管調(diào)零，讀取吸光度A1，90秒后讀吸光度A2，其中，測區(qū)吸光度的主波長500～600nm，副波長650～750nm；

第四步，計算：

根據(jù)如下公式計算得出血清β-羥丁酸濃度：

血清β-羥丁酸（mmol/L）=?ΔA測定×標準濃度/ΔA標準。

上述的血清β-羥丁酸試劑盒的檢測方法，第一步，預備：

血清β-羥丁酸測定試劑盒R1與R2試劑與待測標本的比例為：40～50?:?8～12?:?1。

上述的血清β-羥丁酸試劑盒的檢測方法，第一步，預備：

標準液采用健康人血清為基質(zhì)，所述標準液的制備方法為：

用健康人血清混合，反復凍融數(shù)次至上層澄清，取澄清的上層液經(jīng)0.15um～0.30um濾膜的過濾器過濾后，添加0.05%～0.1wt%生物防腐劑，混勻，待用。用做標準液的基質(zhì)，經(jīng)二級或一級參考品和參考測量方法量值溯源定值。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點及有益技術(shù)效果：

本發(fā)明的血清β-羥丁酸試劑盒設(shè)計成雙試劑，R1內(nèi)含β-羥丁酸進行反應的主要成分，采用磷酸鉀緩沖液，PH7～8，此PH下有利于氯化硝基四氮唑蘭和其他反應物的穩(wěn)定和保存。R2的PH7～8有利于酶的穩(wěn)定也為反應提供適宜的環(huán)境。