[發(fā)明專利]一種應(yīng)用重組畢赤酵母穩(wěn)定地生產(chǎn)豬α干擾素的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310488705.8
• 申請日: 2013-10-17
• 公開（公告）號: CN104561199A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于瑞嵩;史仲平;李震;高敏杰;丁健;董世娟;朱于敏
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院;江南大學(xué)
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12R1/84
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種重組畢赤酵母發(fā)酵生產(chǎn)豬α干擾素的方法，所述的重組畢赤酵母含有豬α干擾素表達盒，其特征在于，所述方法包括：

(1)將重組畢赤酵母在以甘油為碳源的初始培養(yǎng)基中培養(yǎng)，當(dāng)溶解氧濃度快速上升時，啟動甘油流加；維持培養(yǎng)過程中乙醇濃度低于2g/L；當(dāng)酵母細胞達到高密度時，停止流加甘油，饑餓培養(yǎng)酵母細胞至碳源耗盡，啟動甲醇誘導(dǎo)培養(yǎng)；

(2)在發(fā)酵液中流加甲醇和山梨醇，使甲醇濃度控制在5±1g/L，誘導(dǎo)表達豬α干擾素。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，當(dāng)初始培養(yǎng)基中甘油耗盡時，啟動改良型DO-Stat控制程序流加甘油培養(yǎng)基，包括：預(yù)先設(shè)定乙醇濃度的控制水平≤2g/L，當(dāng)乙醇濃度超過該設(shè)定值，適度減小甘油流加的延遲時間；而當(dāng)乙醇濃度低于該設(shè)定值時，適度增大甘油流加的延遲時間，以保證細胞的高速生長。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，按照下列公式調(diào)節(jié)甘油流加延遲時間：

T(k)=T(k-1)+P×(CEtOH*-CEtOH(k)),T≥0,T(0)=1---(I)]]>

其中，T(k)和T(k-1)分別表示當(dāng)前和上一個控制周期的流加延遲時間(min)；C^*_EtOH和C_EtOH(k)分別表示乙醇濃度的控制水平及其當(dāng)前在線測量值；P為甘油流加延遲時間的調(diào)整參數(shù)；P=0.67min·L/g。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酵母細胞達到高密度是指酵母細胞密度達到120～150g-DCW/L。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，重組酵母細胞接種量20±5%(v/v)。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，起始培養(yǎng)時，通氣速度4±1vvm，溫度30±2℃；pH6.0±0.2。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，甲醇和山梨醇進行共混流加。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，甲醇和山梨醇在流加培養(yǎng)基中的體積比為(0.5-6):1。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，甲醇和山梨醇在流加培養(yǎng)基中的體積比為(1-4):1；更佳地為1:1。

10.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：從發(fā)酵產(chǎn)物中分離純化豬α干擾素。